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液质联用系统
基础知识

什么是液质联用系统?

液质联用系统 (LC/MS) 是一种融合液相色谱的分离能力与质谱仪作为检测器的直接质量数测量能力的分析技术。液相色谱能够分离各种化合物,而质谱检测器则提供了有关分子量、结构、特性、数量和纯度的有价值的信息。

阅读下文,了解有关 LC/MS 仪器的典型部件及其基本操作原理的更多信息。

液相色谱的工作原理是什么?

液相色谱 (LC) 又称高效液相色谱 (HPLC),用于分离液相中所包含的化合物混合物。制备样品并将其溶于合适的溶剂(例如甲醇)中,然后泵入色谱柱。

在反相液相色谱中,色谱柱(固定相)采用非极性填料,而溶剂(流动相)为极性溶剂。在高压(约 200–1200 bar)下使溶液中的分析物分子通过色谱柱,在色谱柱中与固定相发生相互作用。疏水性化合物在色谱柱上的保留时间更长。化合物按其保留时间分离后,可能会继续进入正交的另一种检测器。

了解关于 LC 的更多信息

为什么将液相色谱与质谱 (MS) 配合使用?

可以将各种检测器集成到液相色谱系统中。最常见的检测器有吸收光、荧光、示差折光、蒸发光散射和质谱检测器。

  • 当分析物具有显著的紫外 (UV) 吸收时,UV 检测器通常用于定量分析样品中的分析物含量。
  • 质谱可提供独特、有价值的正交信息。如何实现?通过鉴定同时可重现地定量那些由于缺乏发色团或色谱分离不完全而无法进行紫外检测的化合物。

如图所示,通过紫外检测器仅检测到两个峰,但样品实际上包含三种化合物。质谱仪能够检测到在紫外检测器中共洗脱的其他化合物。

质谱的工作原理

质谱 (MS) 用于测定气相离子及其碎片的质量数。分析物电离并基于其质荷比进行过滤;它们作为离子进行检测,并计算其中性质量数。

化合物经液相色谱分离后,在质谱仪中遇到的第一个组件称为离子源

电喷雾电离 (ESI) 是一种常见的电离技术,其在分析物到达质谱仪的进样口毛细管之前,在溶液中生成分析物离子。在强静电场和加热干燥气的存在下,液相色谱洗脱物在大气压下被喷入(雾化)到腔室中。高温导致溶剂进一步脱离分析物分子。

通过进样口毛细管进入质谱仪后,一系列电极(称为透镜)引导带电的分子离开离子源到达四极杆质量分析器(或质量过滤器)。

四极杆由施加直流电压和射频的四根杆组成。这些力的不同组合确保在给定时间内仅特定质量(称为质荷比或 m/z)的碎片沿着四极杆的电场向检测器移动。此功能可显著降低噪音并提高灵敏度。

为生成质谱图检测器记录各给定时间内到达的离子的信号强度。这种质谱图可用于鉴定,就像指纹一样。此外,所记录的不同离子形态的响应可经过校准以用于定量目的。

LC/MS 的优势是什么?

LC/MS 提供额外的选择性维度,其数据来自紫外和质谱两种检测器。分析物通过高效液相色谱 (HPLC) 或超高效液相色谱 (UHPLC) 分离,从而生成 UV 色谱图,其中每种分析物的单个峰按保留时间分离。

对于每个时间点,还将形成一幅质谱图,并可以对其进行解析以鉴定在该时间点洗脱的组分的 m/z。借助质谱信息,无需参比标样即可鉴定分析物,并且可以按质量数分离共洗脱峰。

与其他液相色谱检测器相比,质谱检测器对大多数化合物的灵敏度更高且特异性强得多。质谱检测器可以分析缺乏合适的发色团(其他常见 HPLC 检测器所要求)的化合物。它们还能够鉴定未分离(共洗脱)色谱峰中的不同组分,减少对完美色谱分离的需求。此外,可以将质谱数据与利用其他液相色谱检测器得到的数据结合起来,可靠地鉴定、确认和定量化合物。