采用 Agilent 1290 Infinity II 2D-LC 解决方案，实现蛋白质治疗性药物中聚集体的高分辨率、高效的定量分析

Patrick Cronan 与 Michael Kruger
安捷伦应用科学家

Timothy Rice
安捷伦全球产品经理

蛋白质类生物药物（如单克隆抗体和重组蛋白）目前应用十分广泛。蛋白质治疗性药物远比小分子药物复杂，因此成为了一项复杂的分析挑战。在这些重要药物的开发和使用期间，我们需要对这些分子进行深入的表征。[1]

Protein A 是金黄色葡萄球菌细胞壁上发现的一种免疫球蛋白-Fc (IgG) 受体。它对多克隆和单克隆 IgG 有很强的亲和力，如人 IgG 1、IgG 2 和 IgG 4。 对来源于其它种类，如兔和一些鼠类的 IgG 也是如此。固定化的 Protein A 通常用于 IgG 的制备和大规模生产纯化。 在分析方面，Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色谱柱可用于复杂混合物或纯净样品中 IgG 的快速定量分析和小规模纯化。[1, 2]

图 1. 采用 AdvanceBio SEC 色谱柱实现准确的聚集体分析

Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统为快速的聚集体分析奠定了基础

该研究中使用的二维液相色谱解决方案包括 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统，作为第一维系统。该生物惰性液相色谱系统通过 Agilent InfinityLab 2D-LC Quick Change 快速更换阀（即一种多中心切割阀（具有 12 个出厂已安装的 40 µL 样品定量环）），与 Agilent 1290 Infinity II 高速泵连接，实现第二维色谱分析。第一维和第二维均配置了二极管阵列检测器。在该示例中，样品为从 Sigma 购买的 IgG 标准品。第一维的方法参数见表 1。第二维的技术指标见表 2。

图 2. 热应激 IgG 的 Protein A 亲和捕获与体积排阻分离

图 3. IgG 和热应激 IgG 的二维体积排阻分离叠加图

二维分离技术节省时间并可提高分析效率

二维分离可以提高单克隆抗体中聚集体分析的速度。通过组合聚集体表征中的两个步骤，我们可以一次进样完成整个分析，因此不再需要单独的馏分收集步骤。

在证实了 Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案在一次分析中联用 Protein A 和 SEC 技术的可行性之后，我们开始使用二维方法对不同聚集体的浓度进行 SEC 检测。IgG 标准品在 65 °C 水浴中热应激处理 24 h。 热应激处理后，聚集体的浓度增加，如图 2 和图 3 所示。我们可以看到，从单体到二聚体，聚集体实现了良好分离，见 图 3。

如需了解全部研究结果，请下载并阅读安捷伦应用简报 5991-7223EN。

Agilent 1290、液相色谱柱以及 AdvanceBio SEC 联用，可实现全面、快速的分析

Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案提供了一种通用高效的方法，可以在单个方法中测定 mAb 的滴度和聚集度，不再需要馏分收集和多次进样。Agilent Bio-monolith Protein A 色谱柱作为二维液相色谱工作流程的第一维，非常适合于 mAb 滴度测定前的分析型纯化，以及聚集度分析前的初步纯化。新型 Agilent AdvanceBio SEC 300Å 色谱柱用于二维液相色谱工作流程中的第二维，对单体的聚集体分析具有优异的分辨率，从而实现了准确的评估。

安捷伦可提供多种液相色谱系统、色谱柱和备件

了解多种专门设计的液相色谱系统、色谱柱和备件，确保您繁忙的实验室具有最高的工作效率。无论您是在寻求提高样品通量、加快方法开发，还是解决棘手的分析应用问题，安捷伦高度模块化的方法都能为您提供实现成功所需的灵活性。如需了解更多信息，请联系安捷伦客户服务中心，帮助您确定适合您具体分析应用的解决方案。

参考文献

1. 用 Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色谱柱快速测定人多克隆 IgG，安捷伦科技应用简报，出版号 5989-9733CHCN，2008。
2. 采用 Agilent Bio-Monolith 蛋白质 A 色谱柱监测细胞培养液中的单克隆抗体滴度，安捷伦科技应用简报，出版号 5991-2990CHCN，2014。

仅限研究使用。不可用作诊断方法。
本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。

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文章目录 — 2016 年 9 月