Access Agilent 电子期刊，2016 年 10 月

Agilent 1260 Infinity II 解决方案可实现快速、灵敏的自动化氨基酸分析

Christian Gotenfels，安捷伦液相色谱解决方案经理

图 1. 完整的单供应商解决方案（包括化学品/标准品、色谱柱和应用技术支持），可实现快速、灵敏和自动化的氨基酸分析

图 2. 1260 Infinity II 样品瓶进样器的自动化衍生可提供高重现性的反应结果，并避免了繁琐的手动操作

用于蛋白质表征和细胞培养基监测的氨基酸分析是生物制药业的一项重要应用。在食品行业，它广泛用于营养分析、发酵过程监测，以及食品来源的鉴定。为了改善这些重要应用的工作流程效率，全新的 Agilent 1260 Infinity II 氨基酸分析解决方案（图 1）融合了液相色谱仪器和色谱柱技术最新进展的优势与成熟的柱前衍生化技术。

自动化柱前衍生与全新的 1260 Infinity II 样品瓶进样器

氨基酸是极性分子，它们大多数不会明显吸收紫外-可见光。为了提高氨基酸的疏水性以实现其反相色谱柱分离，并且采用紫外和荧光检测器对其进行检测，我们需要在分析之前对氨基酸进行化学衍生。通过使用新型 Agilent 1260 Infinity II 样品瓶进样器的进样器程序功能，该衍生步骤可自动完成。在线衍生过程中，首先在 3-巯基丙酸存在的条件下，一级氨基酸与邻苯二甲醛 (OPA) 反应，然后二级氨基酸与氯甲酸-9-芴甲酯 (FMOC) 反应。与离线的柱前衍生化方法相比，该方法消除了繁琐的手动操作，并且降低了因操作者的技能或污染原因可能出错的风险（图 2）。此外，自动化还可提供高重现性的反应结果。

InfinityLab Poroshell 120 HPH 可在高 pH 条件下实现快速、稳定的氨基酸分离

图 3. 21 种氨基酸 (90 pmol/µL) 和内标（正缬氨酸和肌氨酸）在 Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18 色谱柱（4.6 x 100 mm，2.7 µm）上的快速分离。采用 1260 Infinity II 荧光检测器进行检测

Agilent InfinityLab Poroshell 120 HPH-C18 色谱柱基于表面多孔颗粒 (SPP) 技术，包括一个实心核 (2.7 µm) 和一个表面多孔外壳 (0.5 µm)。它们提供了如同亚 2 µm 全多孔颗粒拥有的快速和高分辨率，但是背压却低 40 - 50%（图 3）。此外，由于使用了 2 µm 孔径的筛板，它们可以像 3.5 和 5 µm 颗粒色谱柱一样起到防止堵塞的作用。因为氨基酸是在 pH 8.2 的磷酸盐缓冲液条件下实现分离的，因此，Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18 颗粒表面要进行化学修饰，以形成一个有机层。这个有机层可阻止硅胶在高 pH 条件下溶解，使色谱柱在这些分离条件下实现更长的使用寿命。

检测的高灵敏度和灵活性

通过用 OPA 和 FMOC 试剂标记氨基酸来改善检测的灵敏度和选择性。由于一级和二级氨基酸衍生物的最大吸收波长不同，Agilent 1260 Infinity II 多波长检测器可同时在两个波长处进行检测，而不降低灵敏度。为了进一步提高可靠性，Agilent 1260 Infinity II 二极管阵列检测器 WR 可采集更多光谱信息，实现谱峰的鉴定和纯度分析。 Agilent 1260 Infinity II 系列荧光检测器是氨基酸分析的首选检测器。因为荧光是一种罕见的现象，所以该检测器可减小基质干扰，提供最高的选择性，并且可实现低至飞摩尔级的最高检测灵敏度。

Agilent 1260 Infinity II 可通过简单的方法转换来应对其他 (U)HPLC 应用

Agilent 1260 Infinity II 氨基酸分析解决方案具有高达 600 bar 压力和 5 mL/min 流速的性能范围，还可用于其他 HPLC 和 UHPLC 分析应用。例如，在安捷伦应用简报5991-6914CHCN 中，可以了解如何将在 Agilent 1100 系列四元液相色谱上建立的方法平稳转换到 Agilent 1260 Infinity II 氨基酸解决方案中。即使是现有的基于全多孔 ZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱的氨基酸分析方法也可方便地进行转移，因为 Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18 具有与其相似的选择性。

如需更多了解有关新一代 Agilent 1260 Infinity II 氨基酸解决方案的信息，请随时浏览产品样本和信息丰富的解决方案页面。然后联系安捷伦客户服务中心，了解针对您繁忙实验室的下一步措施。