Access Agilent 电子期刊，2016 年 11 月

安捷伦与印度生物制药行业思想领袖合作，推动生物仿制药表征研究

作者：Ravindra Gudihal
安捷伦市场开发应用科学家

Debdip Ghosh
安捷伦生物色谱柱产品专家

全球的生物制药公司已经开始着手整顿其各分析部门以保持市场竞争力，同时满足监管部门的严格要求。印度市场主要关注生物仿制药的生产—即原研药治疗性蛋白质分子复制品。由于采用的工艺不同，生物仿制药并不是原研蛋白完全相同的复制品，而是具有与原始分子十分类似的功效。一些分析技术，例如液相色谱、液质联用和光谱，已成为证实原研药和其生物仿制药物产品间相似性的十分关键和有价值的工具。

探索印度的生物制药创新与扩张

为了解决印度生物制药行业的特殊需求，安捷伦在其先进的班加罗尔分公司举办了一次生物制药工作流程解决方案研讨会，旨在探索生物仿制药的表征工作。该研讨会的目的是向从发现到开发以及质量控制环节中需要对生物药物进行表征的客户，展示安捷伦的生物制药工作流程解决方案。该活动参会人数众多，参会者包括印度新兴生物制药行业的思想领导者，为与业界专家的合作提供了一个可靠平台。

为期两天的研讨将提供学习、意见交流以及合作的机会

图 1. 生物制药研讨会专场在安捷伦卓越中心实验室（左）和印度市场开发中心（右）举办。

图 2. 研讨会中所示范的工作流程的结果：(A) 电荷异构体分析；(B) ADC 的体积排阻分析；(C) mAb 的反相液质联用分析；和 (D) 采用安捷伦的 DAR 计算器进行的药物/抗体比率分析。

超过 25 名代表参加了此次为期两天的研讨会，包括研发专家、方法开发科学家、下游科学家以及参会公司的 QA/QC 分析人员。对此次研讨会进行介绍之后，作了关于生物分子表征的主题报告。设有互动问答环节，为所有的参会者提供思想交流和相互学习的机会。由于单克隆抗体 (mAb) 占据了生物治疗药物市场的主要份额，因此研讨会各个环节重点关注蛋白分子的表征。与会者参加了在实验室进行的多项活动（图 1）。重点包括有关肽图分析、聚集体分析、电荷异构体分析和完整分析的工作流程实例和应用。

采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统示范的肽图分析工作流程

执行蛋白质的肽图分析以确认序列一致性，该方法是比较原研药和生物仿制药最常用的方法之一。研讨会期间，通过配备有 AdvanceBio 肽谱分析色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统与采用 iFunnel 技术的 Agilent 6550 精确质量 Q-TOF LC/MS 联用，采用其生成的数据示范了肽谱分析。采用 MassHunter BioConfirm 软件示范数据分析，利用了其独特功能，例如序列匹配和二硫键定位（图 2）。

体积排阻色谱可实现卓越的聚集体分析

聚集体分析是蛋白生物治疗药物中的一项重要的关键质量属性 (CQA)。样品中聚集体分析的黄金标准是体积排阻色谱 (SEC)。研讨会参会者体验了一次 mAb 样品分析的现场演示，演示采用新推出的 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱以及Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统进行。

电荷异构体分析工作流程示范提供了深入了解的机会

电荷异构体分析是 mAb 的另一项 CQA。工作流程包括采用离子交换 (IEX) 色谱柱在盐梯度或 pH 梯度下分离电荷异构体，将不同的异构体从 Agilent Bio IEX 色谱柱中洗脱出来。储存或处理过程中，由于氧化和脱酰胺基化等修饰作用，分子中可能会出现电荷异构体。

此次研讨会中，采用 Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案示范了一种生物仿制药 mAb 的电荷异构体分析。离子交换色谱柱用于第一维，反相柱用于第二维。对相同的分子，数据采用二维 LC/MS 展示。生成蛋白质电荷异构体分离所需的 pH 或离子强度梯度的理想工具是安捷伦缓冲液顾问软件。

液质联用 — 完整蛋白质分析和碎片分析的最佳选择

完整蛋白质分析包括蛋白质分子 (mAb) 的分子量确认及其不同的翻译后修饰分析。该分析的理想选择是液质联用系统。以 mAb 为例，采用 Agilent AdvanceBio 反相/PLRP-S 色谱柱与四极杆飞行时间质谱联用进行现场示范，结果展示出了更好的峰形和分离度。质量分析采用 MassHunter BioConfirm 软件来完成。此外，还展示了采用 AdvanceBio N-糖链样品前处理试剂盒进行的糖链分析，目的是示范 mAb 中的糖链分析。

杰出教授就印度生物制药公司面临的挑战作了深刻报告

基于研讨会合作的目的，特邀来自德里印度理工学院的 Anurag Rathore 教授做了一次讲座。Rathore 教授是生物制药领域里的一名德高望重的思想领袖，因在生物制药相关工艺中采用质量源于设计 (QbD) 原则而享有盛名。他的报告侧重于采用不同的生物物理技术表征 mAb，以及在表征过程中采用 QbD 原则实现工艺优化。Rathore 教授详述了印度生物制药的总体情况，以及印度生物制药公司在开发生物仿制药方面面临的挑战。

安捷伦持续提供专题讨论会、研讨会和各种学习机会

安捷伦与业界思想领袖和客户的此次最新合作获得了一致好评。通过安捷伦对生物分子的分析，与会者不仅获得了新的见解，还探究了全面的工作流程解决方案。持续进行的生物制药专题研讨会将涵盖 CE、CEMS 以及仪器故障排除等方面的主题。如需了解关于安捷伦的全系列LC、LC/MS 和 Q-TOF 解决方案，以及 MassHunter 软件的更多信息，请立即联系安捷伦客户服务中心。