Agilent 1290 液相色谱和 6550 iFunnel Q-TOF 相结合，为原创药和生物仿制单克隆抗体药物提供快速、高分离度的肽谱分析

Ravinda Gudihal，安捷伦科技公司应用专家

如今，由于原创药具有专利权期，生物仿制药的开发不断增长，尤其是在发展中国家更是如此。生物仿制单克隆抗体 (mAb) 药物是获审批原创药的仿制品，目前被认为是治疗各种癌症的最重要一类生物大分子。在本文中，我们探讨了在生物仿制单克隆抗体药物肽谱分析中使用的技术和应用。

图 1. 采用配备 Agilent AdvanceBio 肽谱分析柱的 LC/MS 分析胰蛋白酶消解的 mAb 所获得的总离子色谱图 (TIC)，(A) 原创药，(B) 生物仿制药

图 2. Agilent MassHunter BioConfirm 软件对比分析功能

肽谱分析对抗体质量评价至关重要

在制药行业中，肽谱分析是评价抗体质量的常用技术，对于展示原创药和生物仿制药之间序列和修饰的相似性非常重要。肽谱分析包括用蛋白酶对蛋白质/mAb 进行消解，然后用 LC/MS/MS 进行分析。为了确保生物仿制单克隆抗体药物的质量，并展示与原创药物的分子相似性，对其氨基酸序列的确证至关重要。

在一个应用中，对用于治疗淋巴癌、关节炎和白血病的商品美罗华原创药和生物仿制药进行了胰蛋白酶消解，然后用 Agilent 6500 系列 LC/Q-TOF MS 进行多肽分离和质量测定。对原创药和生物仿制药的序列相似性、氧化和脱酰胺基状态进行了比较（图 1）。

为了探索原创药和生物仿制药肽谱之间的差异，使用 Agilent MassHunter 比较分析软件的比较文件功能生成了一个 TIC 的镜像曲线（图 2）。

集成的安捷伦系统提供快速、准确、高分离度的肽谱分析

• Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统提供了液相色谱仪器之间的无缝方法转移，保留时间和色谱峰分离度都保持不变
• 将高达 1200 bar 的超高压力与 5 mL/min 的高流速相结合，拥有极广的性能范围，可获得最佳色谱性能、兼容性、灵活性和投资保护
• 革命性的安捷伦最大光强卡套式流通池，拥有 60 mm 光程长度，具有超高灵敏度。
• Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 可提供高分辨精确质量 MS/MS 的全部功能，并可为研究或常规应用进行配置
• 提高了离子传输效率，在所有高分离度 LC/MS 中能获得最低的检测限
• 柱上灵敏度提高 5 倍，延长正常运行时间，为高通量应用提供最高灵敏度
• Agilent MassHunter BioConfirm 软件和 Agilent MassHunter 比较分析软件提供自动化数据提取、序列匹配、PTM 鉴定和序列覆盖计算

实例：原创药和生物仿制药肽谱分析中使用的安捷伦解决方案

在我们的例子中，美罗华生物仿制药和原创药购自药房，并且按照制造商的说明进行储存。此外，还购买了 DL-二硫苏糖醇 (DTT)、碘乙酰胺、Tris 碱、高质量序列级胰蛋白酶和 LC/MS 级溶剂。

因为肽谱分析被认为是蛋白质分析的“指纹”分析，所以这是比较美罗华及其生物仿制药相似性的绝佳技术。使用 BioConfirm 的分子特征提取功能，从 LC/MS 分析中获得多肽的质量数。多肽质量数还被用于定量测定氧化和脱酰氨基作用的程度，这是在储存、制剂和样品处理过程中两种最常见的修饰。

该应用的全部信息可参考安捷伦出版物 5991-6522EN 。

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文章目录 — 2016 年 6 月