Access Agilent 电子期刊，2016 年 4 月

利用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱解决常规 SEC 的难题

Linda Lloyd，安捷伦生物色谱柱产品经理

治疗性蛋白是制药市场上一个快速增长的领域。治疗性蛋白的聚集/降解状态是一项关键质量属性。关于治疗性蛋白的质量控制法规（如 ICH(Q6B)）明确指出必须分离并定量目标产品中的聚集体。体积排阻色谱法 (SEC) 能够根据溶液中溶质的尺寸将溶质分离，是定量分析蛋白质聚集体的首选方法。

利用 Agilent AdvanceBio SEC 获得更出色的分离度和更短的运行时间

许多与常规 SEC 相关的难题阻碍了治疗性蛋白的开发和表征。这些难题包括分离速度慢和运行时间长。使用 300 mm 色谱柱和 0.8 mL/min 流速的标准高分离度条件可能导致样品运行时间达 20 分钟或更长。过长的运行时间会将最大通量限制为每小时三个样品。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或优化发酵条件时），要求对聚集体的形成情况进行监测，从而导致需要对大量样品进行 SEC 分析。过长的运行时间极大限制了对大量样品的分析能力，导致样品积压并形成数据瓶颈。

此外，蛋白质在压力条件下容易发生降解和聚集。流动相并不影响样品组成，这很关键。因此，适宜选用中性 pH 的水性流动相和低浓度盐类。多数利用水性流动相进行抗体药物偶联物 SEC 分析的已公布方法会导致峰形较差和分离不完全。该问题通常可以通过采用有机溶剂（例如丙醇）来解决。然而，添加有机改性剂得到的较差分离度具有不确定性，并且增加了重复样品分析或方法重新验证的需求。

安捷伦新型 AdvanceBio SEC 生物色谱柱从头开发，克服了这些难题。该色谱柱含有采用键合技术的独特 2.7 µm 硅胶颗粒，其设计可用于获得最高的柱效，且不存在堵塞或样品剪切降解的风险。这种独特的制造方法可控制孔径、结构和体积。将亲水聚合物涂层施加于颗粒之上以确保蛋白质峰尖锐且分离度良好。

图 1. 在高通量和高分离度条件下 IgG 的比较色谱图

图 2. Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱的平行技术比较

图 3. 在高分离度条件下，免疫球蛋白的体积排阻分析

新技术使样品通量和分析效率提高 400%

Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱的突破性技术解决了分离速度慢的问题，使您能够按时交付结果。全新的硅胶颗粒提供了出色的分离度，能够运行更短的色谱柱。AdvanceBio SEC 色谱柱在较短的 150 mm 色谱柱上分离免疫球蛋白 G (IgG) 获得了与 300 mm 色谱柱相当的分离度（图 1）。然而，使用这一较短的色谱柱只需要一半的运行时间。此外，Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱优异的颗粒稳定性使其能够在极高的流速条件下运行，并且不会导致性能过度下降。

在 Agilent AdvanceBio SEC 300Å 150 mm 色谱柱上分析 IgG 的过程中，将流速提高至 1.5 mL/min 的影响如图 2 所示。更高的流速不会改变单体峰面积的定量分析或聚集体含量测定。然而，在 1.5 mL/min 这一较高的流速下，样品运行时间可缩短至 4.8 分钟。我们的示例表明使用较短的 150 mm 色谱柱和较高的 1.5 mL/min 流速使样品通量得到了显著提升。利用较高的流速能够获得每小时 12 个样品的最佳容量，并使样品通量和分析效率提高 400%。

实现样品完整性、可重现的结果并且避免了
重新分析

上述结果表明该技术能够实现更高的分析效率。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱能够为各种样品类型提供优异的分离度和大小分离效果，无需将有机改性剂添加至流动相。实际上，AdvanceBio SEC 允许使用能够促进蛋白质天然结构的条件。此外，这些条件可降低样品完整性的不确定性，获得可重现的结果并且无需进行样品重新分析。

Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱所提供的突破性技术，解决了与 SEC 相关的难题，消除了不确定性，并使您能够快速可靠地分离蛋白质聚集体和降解产物（图 3）。

如需了解本研究的全部详情，请参阅免费提供的安捷伦出版物 5991-6458CHCN。

安捷伦提供了一整套液相色谱解决方案

Agilent Advance Bio SEC 色谱柱能够在色谱柱间、批次间乃至实验室间提供可重现的结果。除 AdvanceBio SEC 以外，安捷伦为生物化学家提供了多种液相色谱解决方案、色谱柱和备件，包括 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱，它为生物分子的分析建立了性能、可靠性和耐用性的新标准。现在请花几分钟时间观看我们信息丰富的视频，并了解有关单克隆抗体表征的更多信息。

仅限研究使用。不可用作诊断方法。
本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。