QuikChange 定点突变试剂盒 — 详情与规格

原始的 QuikChange 定点突变试剂盒无需将亚克隆插入 M13 型噬菌体载体以及单链 DNA 拯救。这使得定点突变研究简单可靠，并可以通过寡核苷酸介导的位点特异性突变引入几乎任一双链质粒 DNA。

QuikChange 定点突变试剂盒可用于制备点突变、转换氨基酸，以及删除或插入单个或多个氨基酸。使用 PfuTurbo DNA 聚合酶和温度循环仪施行 QuikChange 定点突变方法。PfuTurbo DNA 聚合酶以高保真度复制两条质粒链，无需变换突变寡核苷酸引物。基本方法是利用具有目的插入物的超螺旋双链 DNA (dsDNA) 载体和含有所需突变的两个合成寡核苷酸引物（见图 1）。与载体的相反链互补的每个寡核苷酸引物在温度循环期间通过 PfuTurbo DNA 聚合酶延伸。寡核苷酸引物的掺入可产生含有交错切口的突变质粒。温度循环后，用 Dpn I 处理产物。Dpn I 核酸内切酶（靶标序列：5'-Gm6ATC-3'）对甲基化和半甲基化 DNA 具有特异性，用于酶解亲本 DNA 模板并选择包含突变的合成 DNA。从几乎所有 E. coli 菌株中分离的 DNA 均为 Dam 甲基化状态，因此易受 Dpn I 酶解的影响。之后将含有所需突变的带切口载体 DNA 转化为 XL1-Blue 超级感受态细胞。进行此方法仅需少量起始 DNA 模板，PfuTurbo DNA 聚合酶的高保真度和低热循环次数都有助于提高突变效率并降低反应过程中产生随机突变的可能性。

图 1. QuikChange 定点突变方法概述

QuikChange II XL 定点突变试剂盒来源于 QuikChange II 定点突变方法。该试剂盒的 XL 版本专门用于大片段 (8 kb – 14 kb) 或其他难以突变的质粒模板的有效突变，并带有专为更高效的 DNA 复制和细菌转化而设计的组分。提供 QuikSolution 试剂用于促进大质粒的复制，同时包括 XL10-Gold 超级感受态细胞以确保最高的转化效率。XL10-Gold 细胞的转化效率比原始 QuikChange 试剂盒中使用的 XL1-Blue 细胞的转化效率高 5 倍。此外，XL10-Gold 细胞含有 Hte 表型，可提高较大 DNA 质粒的转化效率。

QuikChange Multi 定点突变系统除具有原始 QuikChange 试剂盒的速度、简便性和可靠性等优势外，还采用了一种具有独特优势的全新技术。QuikChange Multi 系统的新技术可在一轮实验中使多个位点进行突变，每个位点使用一个寡核苷酸。QuikChange Multi 定点突变系统还可以使用含有简并密码子的寡核苷酸使关键氨基酸轻松轻松实现随机化。5 使用 QuikChange Multi 试剂盒无需专门的载体或独特的限制性位点 — 长达 8 kb 的任意质粒几乎均可作为合适的模板。快速三步法可在 4 kb QuikChange Multi 对照质粒中同时在三个不同位点引入突变，效率高于 50％。

仅限研究使用。不可用于诊断目的