这部分列出了设置 XF 分析所需的材料。

这部分列出了设置 XF 分析所需的材料。

注：所有 XFp 检测试剂盒和消耗品均与 XF HS Mini 分析仪兼容。

1.1 安捷伦提供的必需材料

1.2 用户提供的其他必需材料

1.1 安捷伦提供的必需材料

1.2 用户提供的其他必需材料

本部分重点介绍 XF 分析前一天的制备技术，包括细胞接种密度选择指导、XF 组织培养板上的贴壁细胞接种技术，以及 XF 探针板水化技术。

本部分重点介绍分析前一天的制备技术，包括细胞接种密度选择指导、XFp 组织培养板上的贴壁细胞接种技术，以及 XFp 探针板水化技术。

本部分重点介绍分析前一天的制备技术，包括细胞接种密度选择指导、XFp 迷你板、XF HS 迷你板或 XF HS PDL 迷你板上的贴壁细胞接种技术以及 8 孔探针板水化技术。

注：查看工作流程示意图，了解运行 XF HS Mini 实验所涉及的步骤。

选择工作流程步骤以显示帮助内容。

2.1 选择细胞接种密度

2.2 水化探针板

2.2 水化探针板

2.3 设计实验

2.3 接种细胞

2.4 接种细胞

2.4 接种细胞

2.4.1 XFp 迷你板

2.4.2 XF HS 迷你板

2.5 准备 XFp PDL 或 XF HS PDL 迷你板（仅适用于悬浮细胞）

2.1 选择细胞接种密度

2.2 水化探针板

水化 8 孔传感器探针板的基本流程

注：XFp 探针板与 XF HS Mini 分析仪兼容

传感器探针板是 XFp HS Mini 分析平台的重要组成部分。传感器探针板的每个探针尖均布满固态传感器材料，可通过检测 pH 和 O₂ 浓度数据的变化来计算代谢速率。为使传感器能够正常工作，必须对其进行充分水化处理。

在进行 XFp HS Mini 分析前一天：

• 将至少 20 mL XF 校准液加入 50 mL 锥形管中。将其放置在无 CO₂ 培养箱中，37 °C 下培养过夜。
• 将至少 5 mL XF 校准液加入 15 mL 锥形管中。将其放置在无 CO₂ 培养箱中，37 °C 下培养过夜。
• 打开细胞能量代谢分析试剂盒，取出其中的内容物。
• 从绿色盒子中取出 3 包探针板。揭下密封箔，待用。
• 将探针板倒置于水化板旁边。
• 将水化板与探针板分开，并将探针板倒置于水化板旁边。
• 向水化板的每个孔中加入 200 µL 组织培养级无菌水。
• 向孔周围的每个水槽填充 400 µL。
• 将探针板置于水化板上，使探针浸入水中。
• 确定水位足够高，可使探针保持浸没状态。
• 将其放入无 CO₂ 培养箱中 37 °C 过夜。为防止水蒸发，请确保培养箱已适当加湿。
• 学习中心的第 3.1 节将继续介绍探针板水化方案，请继续阅读

• 打开安捷伦 Seahorse 能量代谢分析试剂盒，取出其中的内容物。
• 将探针板倒置于水化板旁边。
• 向水化板的每个孔中加入 1 mL XF 校准液。
• 将水化辅助板放置在水化板顶部。
• 将探针板透过水化辅助板的开口置于水化板上，使探针浸入 XF 校准液中。
• 将探针板置于水化板上，使探针浸入水中。
• 确定 XF 校准液位足够高，可使探针保持浸没状态。
• 将其放入无 CO₂ 培养箱中 37 °C 过夜。为防止 XF 校准液蒸发，培养箱应适当加湿。
• 重要说明：在将探针板放入安捷伦 Seahorse 分析仪之前，必须先取下水化辅助板。否则可能会对探针板和分析仪造成损害。参阅第 3 部分的进一步说明。

2.4 接种细胞

2.3 接种细胞

接种贴壁细胞的基本流程（通常在 XFp HS Mini 分析前一天进行）

对于需要测试的每个密度，根据指导接种贴壁细胞。查看接种悬浮细胞的说明。

安捷伦 Seahorse XFp HS Mini 分析在安捷伦 Seahorse 96 孔 24 孔 8 孔 XFp 细胞培养微孔板 细胞培养迷你板 p、XF HS、XFp PDL 或 XF HS PDL 迷你板上，结合探针板进行。 XFe96 探针板进行。 8 孔探针板进行。本流程介绍了针对安捷伦 Seahorse 分析仪的贴壁细胞接种建议。查看接种悬浮细胞的说明。

首次分析时，建议使用 XF96 细胞培养板、XFe96 探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度。

首次分析时，建议使用两块细胞培养板、两个探针板和 XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度和四种不同的 FCCP 浓度。

首次分析时，建议使用 XF24 细胞培养微孔板、XFe24 探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度。

首次分析时，建议使用 XFp 细胞培养迷你板、XFp 8 孔探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及 XFp 仪器 XF HS Mini 分析仪测试 2–4 种不同的细胞密度。

下图是一个用于接种四个细胞密度的建议 XF96 检测板布局：

2.4.1 XFp 迷你板

孔板类型	最终贴壁细胞接种体积	最终接种密度（仅示例）	换算为 mL
XFp 迷你板/ XFp PDL 迷你板	80 µL	1.0 × 104 细胞/80 µL	1.25 × 105 细胞/mL

接种贴壁细胞的基本流程（通常在 XF 分析前一天进行）

• 接种安捷伦 Seahorse XF24 细胞培养微孔板时建议采用两步接种过程。该两步过程可获得一致的单层细胞。
• 收集并重悬细胞，使其达到在 80 µL 生长培养基中接种的最终所需浓度。最佳细胞接种数量差别很大，通常为 5 × 10³ – 4 × 10⁴ 细胞/孔，但仍须根据经验确定。（如对于 1 × 10⁴ 细胞/孔，每 80 µL 重悬细胞 1 × 10⁴ = 1.25 × 10⁵ 细胞/mL）
• 收集并重悬细胞，使其达到在 100 µL 生长培养基中接种的最终所需浓度。最佳细胞接种数量差别很大，通常为 1 × 10⁴ – 8 × 10⁴ 细胞/孔，但仍须根据经验确定。（如对于 2 × 10⁴ 细胞/孔，每 100 µL 重悬细胞 2 × 10⁴ = 2.0 × 10⁵ 细胞/mL）
• 每孔接种 80 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A1、A12、H1、H12）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
• B–G 每孔接种 80 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A 和 H）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
• 每孔接种 80 µL 细胞悬液。请勿在背景孔 A 和 H 中加入细胞。如果孔底有气泡，可将板以 200 × g 离心 1–2 分钟来去除气泡。
• 每孔接种 100 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A1、B4、C3、D6）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
• 重要提示：在室温下将板在组织培养罩中放置一小时¹。这一过程可以促进细胞分布，减少某些细胞类型的边缘效应。用显微镜观察贴壁情况。
• 将板置于标准细胞培养箱中，使细胞贴壁。贴壁能力强的细胞一般需要 1 小时左右即可贴壁，而贴壁能力弱的细胞则需要 5–6 小时。用显微镜观察贴壁情况。
• 一小时后，检查细胞的贴壁情况。
• 如果细胞贴壁情况较好，则分别向每个孔中额外加入 150 μL 细胞生长培养基（共 250 μL），然后将板转移至标准细胞培养箱。
• 如果细胞没有很好地粘附在板上，则还需要 1–5 小时使细胞牢固附着（在生物安全柜中），然后在每个孔中额外加入 150 μL 生长培养基（共 250 μL）并将板转移至标准细胞培养箱。
• 细胞贴壁后，向每个孔加入 150 µL 生长培养基，使每个孔的培养基总体积达到 250 µL。向孔中添加培养基时，由一侧缓慢加入，以免干扰新贴壁细胞。
• 将细胞置于细胞培养箱中培养过夜。用显微镜观察细胞的生长和健康状况。

1 Lundholt BK, Scudder KM, Pagliaro L. A simple technique for reducing edge effect in cell-based assays. J Biomol Screen. 2003 Oct;8(5):566-7

本部分重点介绍进行 XFp 分析当天所需要的技术，包括检测液制备。接种非贴壁细胞并在 XFp 探针板加药口加载加样溶液。

选择工作流程步骤以显示帮助内容。

3.1 准备探针板和检测液

3.2 清洗细胞

3.3 配制溶液

3.4 加载加样溶液

3.2 接种悬浮细胞

3.2.1 XFp PDL 迷你板

3.2.2 XF HS PDL 迷你板

3.3 清洗贴壁细胞

3.3.1 XFp PDL 迷你板

3.3.2 XF HS PDL 迷你板

3.4 配制溶液

3.5 加载加样溶液

3.1 准备探针板和检测液

配制 XF 检测液

Seahorse 分析需要特定的检测液以实现准确、稳定的代谢活性功能测量。

安捷伦提供的即用型低缓冲培养基 pH 预调节至 7.4 并含有兼容补充剂，可简化实验准备过程并提供一致性的实验条件。查看关于这款即用型 XF 检测液系统的订购信息或下载检测液选择指南。

或者，研究人员可以使用与所用检测试剂盒匹配的一种成分配制检测液。所有成分均可使用一种安捷伦 Seahorse XF 培养基制备，根据具体实验设计添加不同底物/缓冲液，以下示例是 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定细胞能量代谢表型测试。

制备以下 XF 检测液与 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒一起使用。

研究人员应使用与所用检测试剂盒匹配的一种成分配制 XF 检测液。所有成分均可使用一种安捷伦 Seahorse XF 培养基制备，根据具体实验设计添加不同底物/缓冲液，以下示例是 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒细胞能量代谢表型测试。

制备以下 XF 检测液，用于细胞能量代谢表型测试。

安捷伦试剂/安捷伦部件号	最终浓度	体积
Seahorse XF DMEM 培养基，pH 7.4a, b/103575-100 或 Seahorse XF RPMI 培养基，pH 7.4a, b/103576-100	XF 基础培养基（不含酚红）a, b/103335-100 或 XF RPMI（不含酚红）a, b/103336-100	Seahorse XF DMEM 培养基a, b/103575-100 或 Seahorse XF RPMI 培养基a, b/103576-100	-	97.0 mL	9.70 mL
Seahorse XF 葡萄糖（1.0 M 溶液）/103577-100	10 mM	10 µL	10 mM	1.0 mL	100 µL
Seahorse XF 丙酮酸钠（100 mM 溶液）/103578-100	1 mM	1.0 mL	100 µL
Seahorse XF L-谷氨酰胺（200 mM 溶液）/103579-100	2 mM	1.0 mL	100 µL
a XF DMEM 和 RPMI 培养基 (pH 7.4) 的 pH 值经过预调节，在添加 XF 补充剂后无需调节 pH。请参阅以下制备方法。Seahorse XF DMEM 培养基 (pH 7.4) 和 RPMI 培养基 (pH 7.4) 与 XF24 分析仪不兼容。 b 使用其他类型的 XF 培养基制备 使用其他类型的 XF 培养基制备 使用其他类型的 XF 培养基制备 使用其他类型的 XF 培养基制备 使用其他类型的 XF 培养基制备。

制备 XF DMEM 培养基 pH 7.4 或 XF RPMI 培养基 pH 7.4 的基本流程

制备 XF 基础培养基（不含酚红）或 XF RPMI（不含酚红）的基本流程

所需设备：

• 37 °C 水浴
• 已校准的 pH 计
• 搅拌盘
• 无菌滤瓶（0.22 µm 滤膜）和盖子
• 1.0 N NaOH 溶液

安捷伦 Seahorse XF DMEM 培养基 pH 7.4 和 RPMI 培养基 pH 7.4 旨在实现：

• 便捷性：与推荐的安捷伦 Seahorse XF 补充剂共同使用时，无需调节最终 pH 值。
• 一致性：低浓度 HEPES 缓冲液（5 mM，DMEM；1 mM，RPMI）可获得更为一致的 XF 数据。
• 定量：使用具有固定缓冲容量的检测液，可以定量测定质子释放率 (PER)。

1. 将无菌瓶中适当体积的 XF DMEM 培养基 pH 7.4 或 XF RPMI 培养基 pH 7.4 加热至 37 °C。一般而言，一块板需要用 100 mL。
2. 将无菌瓶中适当体积的 XF 基础培养基（不含酚红）或 XF RPMI（不含酚红）加热至 37 °C。一般而言，一块 XF24 板需要用 100 mL。
3. 添加上文表格中提到的适当体积的 Seahorse XF 补充剂（XF 葡萄糖溶液、XF 丙酮酸钠溶液和 XF L-谷氨酰胺溶液）。
4. 用 1 N NaOH 将 pH 值调节至 7.4。注：添加 NaOH 后 pH 值将很快发生变化，调节 pH 值时应少量缓慢添加。
5. 用 0.2 µm 滤膜对检测液进行灭菌。
6. 将最终 XF 检测液于 37 °C 下培养，待用

3.2 接种悬浮细胞

在 XF HS PDL 迷你板和 XFp PDL 迷你板上接种悬浮细胞的基本流程

注：有关在 XF HS PDL 迷你板中接种悬浮细胞的更多信息，请按下文相关支持材料中的说明操作。

悬浮细胞的最佳细胞密度取决于细胞大小。通常情况下，最佳细胞密度应使细胞在孔中呈单层分布，融合度为 70%–90%。强烈建议在显微镜下检查细胞分布情况，以确定（1）细胞之间是否有足够的空间以确保所有细胞与包被表面均匀接触，（2）确保细胞簇非常少。如果接种密度超过最佳密度，或如果细胞成簇，会导致细胞粘附较差，从而导致速率测量不准确。

• 对于细胞培养微孔板，将适当体积的细胞悬液从生长管转移到锥形管中。
• 对于 XFp 迷你板、XF HS 迷你板或 XF HS PDL 迷你板，将适当体积的细胞悬液从生长管转移到锥形管中。
• 计算 Seahorse XFe96 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 100 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 100 孔 = 1.5 × 10⁷ 个细胞）。
• 计算 Seahorse 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 10 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 10 孔 = 1.5 × 10⁶ 个细胞）。
• 在室温下以 200 × g 离心细胞 5 分钟。
• 离心细胞时，向预热的 PDL 包被的 Seahorse XF96 细胞培养微孔板或 Cell-Tak 包被的 Seahorse XF96 细胞培养板的背景/对照孔中加入 50 µL 检测液。
• 离心细胞时，向预热的 PDL 包被的 Seahorse XFp 细胞培养微孔板或 Cell-Tak 包被的 Seahorse XFp 细胞培养板的背景/校正孔（A 和 H）中加入 50 µL 检测液。
• 从离心的锥形管中弃去上清液。
• 用预热的检测液重悬细胞，以获得 50 µL 检测液所需的每孔细胞浓度。（例如，需要 1.5 × 10⁵ 细胞/孔，用适当体积重悬细胞，得到 1.5 × 10⁵ 细胞/50 µL 或 3.0 × 10⁶ 细胞/mL）。
• 将离心机设置更改为零制动。
• 将细胞悬液转移到无菌组织培养槽中，或直接从锥形管中移取。
• 沿每孔的一侧加入 50 µL 细胞悬液，背景/对照孔除外。建议使用多通道移液器。
• 将迷你微孔板置于 XFp 托盘上，以 300 × g 离心 1 分钟，无制动。该托盘可容纳 3 个迷你微孔板，适用于标准离心机微孔板适配器。确保离心机转子经适当平衡。
• 离心后，目测确认细胞在孔底的贴壁情况。
• 以 200 × g（零制动）离心细胞 1 分钟。确保离心机经适当平衡。
• 注意不要扰乱底部的细胞，轻轻向每孔中加入 130 µL 检测液至所需的初始检测体积 (180 µL)。
• 在细胞培养孔周围的水槽中加入无菌水或 PBS，每腔室 100 µL。将 8 通道移液器（如有）设为 50 µL，每个腔室用两个吸头填充水槽两侧。如果没有多通道移液器，向水槽的每个腔室分别加入 100 µL 无菌水或 PBS（共 800 µL）。
• 将板转移至未补充 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 25–30 分钟，确保细胞完全贴壁。目测确认多数细胞稳定附着在培养板表面。
• 沿每个孔的一侧缓慢加入 130 µL 预热的检测液。注意不要扰乱细胞。
• 在显微镜下观察细胞，确保细胞贴壁。
• 将细胞板放回培养箱中培养 15–25 分钟。
• 15–25 分钟后，细胞板即可用于分析。为获得理想结果，离心后的总时间不超过 1 小时。

• 对于 Seahorse XF24 细胞培养微孔板，将适当体积的细胞悬液从生长管转移到锥形管中。
• 计算 Seahorse XF24 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 25 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 25 孔 = 3.75 × 10⁶ 个细胞）。
• 在室温下以 200 × g 离心细胞 5 分钟。
• 离心细胞时，向室温下 Cell-Tak 包被的 Seahorse XF24 细胞培养板的背景/对照孔中加入 100 µL 检测液。
• 从离心的锥形管中弃去上清液。
• 用预热的检测液重悬细胞，以获得 100 µL 检测液所需的每孔细胞浓度。（例如，需要 1.5 × 10⁵ 细胞/孔，用适当体积重悬细胞，得到 1.5 × 10⁵ 细胞/100 µL 或 1.5 × 10⁶ 细胞/mL）。
• 将离心机设置更改为零制动。
• 将细胞悬液转移到无菌组织培养槽中，或直接从锥形管中移取。
• 沿每孔的一侧加入 100 µL 细胞悬液，背景/对照孔除外。安捷伦建议使用多通道移液器。
• 以 200 × g（零制动）离心细胞 1 分钟。确保离心机经适当平衡。对于 XFp 分析仪用户，安捷伦建议使用安捷伦 Seahorse XFp 托盘离心 Seahorse XFp 细胞培养迷你微孔板。如需了解详细信息，请参阅基本流程：在 XFp 细胞培养微孔板中接种悬浮细胞。
• 将板转移至未补充 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 25–30 分钟，确保细胞完全贴壁。目测确认多数细胞稳定附着在培养板表面。
• 沿每个孔的一侧缓慢加入 400 µL 预热的检测液。注意不要扰乱细胞。
• 在显微镜下观察细胞，确保细胞贴壁。
• 将细胞板放回培养箱中培养 15–25 分钟。
• 15–25 分钟后，细胞板即可用于分析。为获得理想结果，离心后的总时间不超过 1 小时。

在 XFp PDL 或 XF HS PDL 迷你板上接种悬浮细胞所需的步骤概述。

3.4 加载加样溶液

3.5 加载加样溶液

• 将 A/D 上样导轨平面置于分析探针板顶部。定位上样导轨，使字母 A 位于左上角。上样时用指尖捏住上样导轨的外缘使之保持稳定，从而使移液吸头不会移动上样导轨。
• 使用 10–100 µL 多通道移液器，确保吸头牢固安装在移液器上。将移液吸头（填充加样化合物）放入上样导轨的目标列中，使吸头略微倾斜一定角度。在无阻力的前提下，将吸头尽可能插入孔中并排出化合物。请勿用强力将吸头完全插入孔中。
• 使吸头保持 45° 角。将吸头一半放入加药口，吸头的斜角抵在加药口的另一面。
• 请勿将吸头完全插入加药口底部，否则可能会导致化合物通过加药口泄漏。
• 根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 20 µL 的适当加样溶液。在整个操作过程中，小心从加药口移走吸头，使上样导轨保持稳定。避免产生气泡。请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
• 按所进行的分析，根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 55 µL 适当加样溶液。小心从加药口移走吸头。避免产生气泡，请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
• 根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 20 µL 适当上样溶液。在整个操作过程中，小心从加药口移走吸头，使探针板保持稳定。避免产生气泡。请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
• 取下 A/D 加药口上样导轨，并换上 B/C 加药口上样导轨，使“B”在左上角。使用 22 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
• 使用 62 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
• 使用 22 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
• 目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保探针板顶端无残余液滴。

用于细胞密度滴定分析的加药口加样

XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的加药口和体积 — 细胞表征
加药口和化合物	体积	10X [加药口]	[细胞孔]
加药口 A 寡霉素	20 µL	55 µL	15 µM	1.5 µM
加药口 B 鱼藤酮 + 抗霉素 A	22 µL	62 µL	5 µM	0.5 µM

孔内最终浓度 (μM)	FCCP 组	孔	加药口/体积 (µL)
寡霉素/FCCP 1.0/1.0	1.0 μM	A1–D6（所有）	A/55

用于 FCCP 浓度滴定分析的加药口加样

如果进行不同类型的 XF 分析，请参阅相应的 XF 试剂盒用户指南和下方说明，了解多个加样溶液的上样方法。

• 缓慢向加药口中排出化合物。小心从加药口移走吸头，在整个操作过程中，使上样导轨保持稳定。
• 避免产生气泡，请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
• 切换到 B/C 上样导轨。将字母 B 定位在左上角。使用合适的上样导轨，对 B、C、D 加药口重复步骤 3–5 所述的上样过程。取下并丢弃上样导轨。
• 对 B、C、D 加药口重复上述步骤的上样过程。
• 目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保探针板顶端无残余液滴。

加样基本信息和指南

• 推荐加样体积为 20–30 µL。
• 推荐加样体积为 50–100 µL。
• 加样后实现 10 倍稀释的推荐加样溶液体积，每个微孔板孔中已有 180 µL 检测液：
  • 加药口 A：20 µL
  • 加药口 B：22 µL
  • 加药口 C：25 µL
  • 加药口 D：28 µL
• 加样后实现 10 倍稀释的推荐加样溶液体积，每个微孔板孔中已有 500 µL 检测液：
  • 加药口 A：55 µL
  • 加药口 B：62 µL
  • 加药口 C：69 µL
  • 加药口 D：75 µL
• 根据实验设计选择加药口的组成、顺序和数量。
• 探针板上样时不建议使用自动移液器，因为可能使加样溶液从加药口泄漏。

本部分重点介绍使用 XF 实时 ATP 速率测定在分析仪上进行细胞初始表征。

本部分重点介绍使用细胞能量代谢表型测试在分析仪上进行细胞初始表征。

本部分重点介绍使用 XF 实时 ATP 速率测定在 XF HS Mini 分析仪上进行细胞初始表征。如需了解有关如何执行分析的详细信息，请参阅 XF HS Mini 用户指南。

重要事项 — 在开始 XF 分析之前

• 目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保传感器探针板顶端无残余液滴。
• 在显微镜下观察细胞：
  • 确定细胞健康状况、形态、接种均匀度和纯度（无污染）。
  • 对于贴壁细胞，确保细胞贴壁形成均匀单层，清洗步骤中不会被冲走。
  • 对于悬浮细胞，确保细胞在离心、清洗和培养后稳定附着。
  • 确保背景孔不含细胞。

参阅 Wave 用户指南第 2 章，了解 XFe 分析仪分析操作的完整细节，包括如何在分析中添加/删除测量值、XFe 分析在 37 °C 以外温度下的环境条件，等等。

在分析 XF 分析结果部分，您将学习关于安捷伦 Seahorse Analytics 的基础知识，以及如何使用 Seahorse Analytics 分析您的 XF 实时 ATP 速率测定结果文件。如果您正在寻找关于 Wave Desktop 和报告生成器的帮助内容，请点击此处。

Seahorse Analytics 是一款基于网页的软件应用程序，它提供桌面式互动，简便易学的界面，让您能够在全球任何地方通过任何计算机分析来自安捷伦 Seahorse XFe、XFp 和 XF HS Mini 分析仪的结果数据。只要您联网，就可以使用 Seahorse Analytics 分析您的 Seahorse 数据。

请注意：对于 XF96 用户，必须首先使用 Wave Desktop 软件将 .xfd 结果文件转换为分析结果文件格式，.xfd 结果文件无法在 Seahorse Analytics 中进行分析。

选择以下主题了解更多信息：

5.1 前言

5.2 分析视图

5.3 数据类型

5.4 数据显示选项

5.5 导出和共享数据

5.1 前言

安捷伦 Seahorse Analytics 是 Seahorse 分析仪分析仪的首选数据分析软件，可以轻松地导入、分析、报告结果，并与团队或合作者共享。

有关安捷伦 Seahorse Analytics 的基本信息：

性能指标	详细信息
用途	数据分析
Seahorse 数据文件兼容性	XFe96 分析结果文件
	XFe24 分析结果文件
	XFp 分析结果文件
	XF HS Mini 分析结果文件
互联网浏览器兼容性	Google Chrome
	Safari
	Mozilla Firefox
	Microsoft Edge 强烈建议不要使用 Internet Explorer
导出选项	Microsoft Excel (.xlsx)
	Graphpad Prism (.pzfx)
	图像文件（.JPG 和 .PNG）

熟悉 Seahorse Analytics 用户界面

主页视图：

注册和/或登录 Seahorse Analytics 账户后，您将进入主页视图（如下图所示）。要返回主页视图，请点击深蓝色导航功能区左上角的 Home（主页）按钮。

1. 主页视图上的数据文件列表显示您从文件共享中导入、编辑和/或接受的五 (5) 个最新文件。
2. 在文件列表下方，您将看到 My Analyzers（我的分析仪），您可以在其中将一个或多个 Seahorse XF 分析仪关联到您的账户。
3. 要从主页视图中导入数据文件，请点击文件列表上方右上角中的 File Upload（上传文件）小按钮。

文件视图：

点击应用程序顶部深蓝色功能区左上角的 Files（文件）按钮，以显示已导入您的 Seahorse Analytics 账户的所有数据文件。

1. 在文件视图的左侧，您将看到为您的账户创建的任何自定义文件夹。
2. 文件列表和随附的文件元数据（即最近修改日期、仪器类型等）显示在文件视图的中间。
3. 在文件视图的右上角，可以看到 File Upload（上传文件）按钮，用于将数据文件导入您的账户。您会看到 Create Folder（创建文件夹）按钮，该按钮可以创建一个新的自定义文件夹，您可以向其分配数据文件。您还会看到一个搜索字段，允许您对账户中的数据文件执行关键字搜索。搜索功能可在文件名、类别、最近修改日期和仪器类型中查找关键字匹配。

资源视图：

点击顶部深蓝色功能区中的 Resources（资源），访问一系列常用资源，以支持您的安捷伦 Seahorse XF 分析工作流程，并获取安捷伦细胞分析支持团队的联系信息。

设置和用户信息：

其他文件管理功能：

在账户中每个文件的右侧，可以看到一个 3 点图标（如下图所示）。

5.2 分析视图

Seahorse Analytics 分析视图在一个页面中集成了多个小组件（图）。有 3 种不同的分析视图 — 标准分析视图、自定义分析视图和检测试剂盒助手分析视图。

• 标准分析视图包含基本的小组件选项，例如动力学曲线图、散点图和条形图，这些小组件选项用于查看特定速率测量或一系列速率测量（即动力学图）的 OCR、ECAR、PER。
• 自定义分析视图列表显示了包含用户选择的预定义小组件的所有自定义分析视图。可将任何类型的小组件添加到自定义分析视图中。
• 检测试剂盒助手分析视图列表显示的各分析视图上的小组件代表选定的安捷伦 Seahorse XF 检测试剂盒的已定义参数。检测试剂盒助手分析视图可用于对使用各自支持的安捷伦 Seahorse XF 分析工作流程和方案生成的文件进行数据分析。

展开 Views（视图）列表以显示应用于分析结果文件的分析视图列表或添加新的分析视图（如下图所示）。

其他重要信息：

• 并非所有的 XF 分析工作流程都能使用 Seahorse Analytics 进行分析。您可以将结果数据导出至 Microsoft Excel 或 GraphPad Prism 以满足自定义分析需求。
• 每个小组件都有自己的板布局，用于控制该小组件的数据图。要编辑数据图，请双击小组件打开小组件编辑器视图。使用图形上方功能区中的功能以及图形右侧的板布局来控制数据图。如需执行文件级别的更改，请转到 Modify（修改）视图。
• 有时，您会希望对分析结果文件进行细微修改。可以通过点击功能区右上角的 Modify（修改）按钮从任何分析视图访问修改功能。使用修改功能对文件进行的更改将影响结果文件中的所有小组件/分析视图（即删除异常值孔、更改组颜色或重命名组）。

空白和自定义分析视图：自定义分析视图功能提供了出色的数据分析灵活性。您可以将任何分析视图保存为自定义视图，但本示例向您展示了如何从空白视图开始创建自定义分析视图。下面的一系列步骤还重点介绍了如何使用空白/自定义视图功能将分析工作流程中的常规步骤自动化，从而提高工作流程的一致性并节省时间。

检测试剂盒助手分析视图信息：

1. Assay Kit Companion Analysis View » XF Cell Mito Stress Test（检测试剂盒助手分析视图 » XF 细胞线粒体压力测试）：要在单个分析视图中计算并显示 XF 细胞线粒体压力测试检测参数：

1. 在 Add View（添加视图）窗口中，点击 Assay Kit Companion View（检测试剂盒助手视图）列表以展开选项列表。
2. 点击 XF Cell Mito Stress Test（XF 细胞线粒体压力测试）分析视图以显示检测参数小组件。
3. 重要提示：对于涉及 4 次加药的 XF 细胞线粒体压力测试，必须使用小组件上方的下拉菜单确定哪一次是寡霉素，然后才能添加此分析视图。这一步骤非常重要，因为正确选择了哪一次是寡霉素加药才能正确计算检测参数；寡霉素加药选择错误将导致小组件计算和图形不正确。
4. 选择所需的参数小组件（例如基础呼吸、最大呼吸等）添加到分析视图。小组件周围的蓝色轮廓表示其已被选中。如果 Acute Response（急性响应）小组件呈灰色，则不能选择，因为该参数仅适用于急性加药的 XF 细胞线粒体压力测试分析。
5. 如有必要，在组列表中关闭/打开组，然后点击 Add View（添加视图）

还可以将单个 XF 细胞线粒体压力测试检测参数小组件（即备用呼吸能力）添加到现有分析视图中：

检测参数	公式
非线粒体耗氧量	加入鱼藤酮和抗霉素 A 后的最低速率测量值
基础呼吸	（首次加药前的末次速率测量值）–（非线粒体耗氧量）
最大呼吸	（加入 FCCP 后的最大速率测量值）–（非线粒体耗氧量）
质子漏	（加入寡霉素后的最小速率测量值）–（非线粒体耗氧量）
ATP 生成关联呼吸	（加入寡霉素前的末次速率测量值）–（加入寡霉素后的最小速率测量值）
备用呼吸能力	（最大呼吸）–（基础呼吸）
备用呼吸能力 (%)	（最大呼吸）/（基础呼吸）× 100%
急性响应	（加入寡霉素前的末次速率测量值）–（急性加药前的末次速率测量值）
关联效率	（ATP 生成关联呼吸）/（基础呼吸）× 100%

4.2. Assay Kit Companion Analysis View » XF Real-Time ATP Rate Assay（检测试剂盒助手分析视图 » XF 实时 ATP 速率测定）：按照下面的步骤在单个分析视图中计算并显示 XF 实时 ATP 速率测定参数。请注意，必须正确配置缓冲系数，才能将此分析视图和此分析视图的小组件添加到分析结果文件中。

1. 在 Add View（添加视图）窗口中，点击 Assay Kit Companion View（检测试剂盒助手视图）列表以展开选项列表。
2. 点击 XF ATP Rate Assay（XF ATP 速率测定）分析视图以显示检测参数小组件。
3. 对于诱导 XF ATP 速率测定（寡霉素和鱼藤酮/抗霉素 A 标准加药前进行 1 或 2 次加药），必须使用小组件上方的下拉菜单确定寡霉素加药是第 2 次还是第 3 次，然后才能添加此分析视图。这一步非常重要，只有正确选择了哪一次是寡霉素加药才能正确计算检测参数；寡霉素加药选择错误将导致小组件计算和图形不正确。有关这两个工作流程的更多信息，请参阅 XF 实时 ATP 速率测定用户手册。
4. 选择所需的参数小组件添加到分析视图。小组件周围的蓝色轮廓表示其已被选中。如果小组件呈灰色，则不能选择，因为分析文件不满足计算参数所需的最少加药次数要求。
5. 如有必要，在组列表中关闭/打开组，然后点击 Add View（添加视图）

还可以将单个 XF ATP 速率测定参数小组件（即 ATP 产生速率（基础））添加到现有分析视图中：

标准 XF 实时 ATP 速率测定

检测参数	公式
线粒体呼吸 ATP 产生速率（基础）	[（首次加药前末次 OCR 速率测量值 - 加入寡霉素后至加入 Rot/AA 前最小 OCR 速率测量值）× 2 × (P/O)]
糖酵解 ATP 产生速率（基础）	首次加药前末次 glycoPER 测量值
总 ATP 产生速率（基础）	（线粒体呼吸 ATP 产生速率）+（糖酵解 ATP 产生速率）
XF ATP 速率指数（基础）	（线粒体呼吸 ATP 产生速率）/（糖酵解 ATP 产生速率）

诱导 XF 实时 ATP 速率测定：

检测参数	公式
线粒体呼吸 ATP 产生速率（基础）	[（首次加药前末次 OCR 速率测量值 - 加入寡霉素后至加入 Rot/AA 前最小 OCR 速率测量值）× 2 × (P/O)]
糖酵解 ATP 产生速率（基础）	首次加药前末次 glycoPER 测量值
总 ATP 产生速率（基础）	（线粒体呼吸 ATP 产生速率）+（糖酵解 ATP 产生速率）
XF ATP 速率指数（基础）	（线粒体呼吸 ATP 产生速率）/（糖酵解 ATP 产生速率）
线粒体呼吸 ATP 产生速率（诱导）	（急性加药后和加入寡霉素前的平均 OCR 速率测量值）-（加入寡霉素后和加入 Rot/AA 前的最小 OCR 速率测量值）]× 2 × (P/O)
糖酵解 ATP 产生速率（诱导）	急性加药后和下一次加药前的糖酵解 ATP 产生速率测量值的平均值。
总 ATP 产生速率（诱导）	线粒体呼吸 ATP 产生速率（诱导）+ 糖酵解 ATP 产生速率（诱导）
XF ATP 速率指数（诱导）	线粒体呼吸 ATP 产生速率（诱导）/糖酵解 ATP 产生速率（诱导）

5.3. Assay Kit Companion Analysis View » XF T Cell Activation Assay（检测试剂盒助手分析视图 » XF T 细胞活化测定）：要在单个分析视图中计算并显示 XF T 细胞活化测定参数：

1. 在 Add View（添加视图）窗口中，点击 Assay Kit Companion View（检测试剂盒助手视图）列表以展开选项列表。
2. 点击 XF T Cell Activation Assay（XF T 细胞活化测定）分析视图以显示检测参数小组件。
3. 选中 Baseline（基线）复选框以计算每个小组件中显示的 PER 数据，以相对于基线速率测量值的百分比 (%) 表示，基线速率测量值是加入活化剂前的最后一次速率测量值。对于定量数据，请勿选中 Baseline（基线）复选框，以 pmol/min 为单位计算 PER。
4. 确保在 Activator Injection（加入活化剂）下拉菜单中选择了正确的加药位置。
5. 选择所需的参数小组件添加到分析视图。小组件周围的蓝色轮廓表示其已被选中。
6. 如有必要，在组列表中关闭/打开组，然后点击 Add View（添加视图）

您还可以将单个 XF T 细胞活化测定参数小组件（即最大速率）添加到现有分析视图中：

下表介绍了 XF T 细胞活化测定参数的计算：

检测参数	公式
T 细胞活化	PER（质子释放率）数据以动力学曲线显示
最大速率	在 Seahorse Analytics 中使用非线性最小二乘曲线拟合算法，使用加入活化剂后和加入 2-DG 前的速率测量数据进行计算。有关该计算方法的更多信息，请参阅： H. J. Motulsky, "Exponential plateau", GraphPad Curve Fitting Guide. Accessed 20 May 2020. https://www.graphpad.com/guides/prism/8/curve-fitting/REG_Exponential-plateau.htm
曲线下面积	在 Seahorse Analytics 中使用加入活化剂后和加入 2-DG 前的速率测量数据进行计算。AUC 值仅包括高于基线的峰值。有关该计算方法的更多信息，请参阅： H. J. Motulsky, "How to: Area under the curve", GraphPad Statistics Guide. Accessed 20 May 2020. https://www.graphpad.com/guides/prism/8/statistics/stat_area_under_the_curve.htm

6.4. Assay Kit Companion Analysis View » XF Glycolytic Rate Assay（检测试剂盒助手分析视图 » XF 糖酵解速率测定）：按以下步骤在单个分析视图中计算并显示 XF 糖酵解速率测定参数。请注意，必须正确配置缓冲系数，才能将此分析视图和此分析视图的小组件添加到分析结果文件中。

1. 在 Add View（添加视图）窗口中，点击 Assay Kit Companion View（检测试剂盒助手视图）列表以展开选项列表。
2. 点击 XF Glycolytic Rate Assay（XF 糖酵解速率测定）分析视图以显示检测参数小组件。
3. 对于诱导 XF 糖酵解速率测定（鱼藤酮/抗霉素 A 和 2-DG 标准加药之前进行 1 或 2 次加药），必须使用小组件上方的下拉菜单确定哪一次是鱼藤酮/抗霉素-A 加药，然后才能添加此分析视图。这一步非常重要，只有正确选择了哪一次是鱼藤酮/抗霉素-A 加药才能正确计算检测参数；鱼藤酮/抗霉素-A 加药选择错误将导致小组件计算和图形不正确。有关这两个工作流程的更多信息，请参阅 XF 糖酵解速率测定用户手册。
4. 选择所需的参数小组件添加到分析视图。小组件周围的蓝色轮廓表示其已被选中。如果小组件呈灰色，则不能选择，因为分析文件不满足计算参数所需的最少加药次数要求。
5. 如有必要，在组列表中关闭/打开组，然后点击 Add View（添加视图）

您还可以将单个 XF 糖酵解速率测定参数小组件（即基础糖酵解）添加到现有分析视图中：

标准 XF 糖酵解速率测定

检测参数	公式
基础糖酵解	首次加药前末次 glycoPER 测量值
基础质子释放率 (PER)*	首次加药前末次 PER 测量值
糖酵解 PER%（基础）	（基础糖酵解）/（基础 PER）× 100%
* 表示该参数未在 Seahorse Analytics 中单独报告，但用于计算其他报告的参数值。

诱导 XF 糖酵解速率测定

检测参数	公式
基础糖酵解	首次加药前末次 glycoPER 测量值
基础质子释放率 (PER)*	首次加药前末次 PER 测量值
糖酵解 PER%（基础）	（基础糖酵解）/（基础 PER）× 100%
代偿糖酵解	加入 Rot/AA 后的最大 glycoPER 测量值
诱导糖酵解	诱导检测加药后和加入 Rot/AA 前的 glycoPER 测量值的平均值
诱导 PER*	诱导检测加药后和下一次加药前的 PER 测量值的平均值
糖酵解 PER%（诱导）	（诱导糖酵解）/（诱导 PER）× 100%
* 表示该参数未在 Seahorse Analytics 中单独报告，但用于计算其他报告的参数值。

编辑小组件数据图：要自定义小组件的数据图，请双击小组件打开小组件编辑器视图。有多种方式可为特定小组件自定义数据图。需要记住，每个小组件的板布局是独立的，意味着在小组件编辑视图上所做的更改将仅应用于相应的小组件。

每张图上方功能区中的功能提供针对该小组件类型的编辑功能，例如更改速率数据类型、打开/关闭归一化或逐孔查看数据而不是查看组平均值。有关这些功能及其使用方法的更多信息，请参阅关于不同小组件的说明。

图右侧的板布局允许您针对所选小组件，在计算和数据图中包括或排除特定的实验孔。

小组件下方的组列表显示了所选小组件类型的组平均值和误差数据。可以双击组名称，在小组件图中显示或隐藏该组中的所有数据。在板布局上关闭的实验孔不包括在组列表显示的值中。当从数据图中排除某个组时，该组将显示为灰色，如下图所示的“对照”组。

定义缓冲系数

一个常见的分析工作流程是为分析结果文件中的检测液和背景孔定义缓冲系数。计算质子释放率 (PER) 需要此信息，在 Seahorse Analytics 的多个检测试剂盒助手分析视图的许多小组件中都会计算和显示 PER（例如 XF T 细胞活化测定）。尝试向未正确配置缓冲系数的分析结果文件添加分析视图将导致错误消息（如下图所示）。将缓冲系数正确分配给分析结果文件中的检测液和背景孔后，可以打开所需的小组件和/或分析视图。

解决缓冲系数错误的步骤 — 如果在向数据文件添加第一个分析视图时出现上面所示的错误，请从下面的步骤 1 开始操作。如果已在数据文件中打开了分析视图，请从步骤 3 开始操作。

1. 点击 OK（确定）以关闭错误对话框。
2. 在 Add View（添加视图）窗口上，选择 Standard Views > Quick View（标准视图 > 快速视图），然后选择 OCR 动力学曲线小组件。

5.3 数据类型

细胞耗氧（呼吸）和质子分泌（糖酵解）导致细胞外氧和质子的浓度快速发生变化且容易测量。安捷伦 Seahorse XF 分析仪可实时测量细胞外氧和质子浓度的变化。使用 Seahorse Analytics，您可以轻松访问和查看以下类型的数据：

1. 速率数据是所有 Seahorse XF 分析仪的主要输出数据。Seahorse Analytics 计算并报告的 3 类速率数据为：

2. 水平数据用于计算速率数据并用于数据质量评估 — 通常是 XF 分析工作流程的第一步。

5.4 数据显示选项

安捷伦 Seahorse Analytics 提供一系列图表类型，可根据选择的分析视图类型来分析和解析分析结果数据。有关创建和自定义分析视图的更多信息，请参阅“分析视图”部分。

1. 小组件类型 — 动力学曲线：动力学曲线是显示 XF 结果数据最常用的一种方式，其中 x 轴为时间（单位为分钟），y 轴为被测分析物浓度的变化率（O₂ 或 H+）。可以在动力学曲线小组件的 y 轴上显示的两种数据类型是：(1) 速率数据 — 耗氧量 (OCR)、细胞外酸化 (ECAR)、质子释放 (PER) 以及 (2) 水平数据 — 氧张力 (mmHg) 或质子浓度 [mpH]。

• Add Widget > Standard Graphs » Kinetics Graph（添加小组件 > 标准图 » 动力学曲线）：
  使用 Standard Graphs » Kinetics Chart widget（标准图 » 动力学曲线小组件）创建所选速率类型（OCR、ECAR、PER）和测量值的动力学曲线。

2. 小组件类型 — 条形图：条形图是呈现 XF 数据的另一种常见方式，可帮助用户进行常规 XF 分析，例如确定最佳 FCCP 浓度和细胞接种密度。Seahorse Analytics 提供了多种条形图选项，可添加到分析视图中，其中许多都是分析特定的。有关特定条形图小组件的更多信息，请参阅此处或 Seahorse Analytics 中的特定检测试剂盒助手分析视图。

• Add Widget > Standard Graphs » Bar Graph（添加小组件 > 标准图 » 条形图）：
  使用 Standard Graphs » Bar Chart widget（标准图 » 条形图小组件）创建所选速率类型（OCR、ECAR、PER）和测量值的条形图。

3. 小组件类型 — 能量图：能量图小组件是 X 和 Y 散点图，可用于比较所有组或选定组中选定速率测量的两种类型的速率数据。除了下面介绍的能量图小组件之外，还有其他几种散点图小组件选项可添加到分析视图中，这些选项是根据不同的分析类型而定的，并在分析视图部分进行了定义。

• Add Widget > XF ATP Rate Assay » XF ATP Rate Index（添加小组件 > XF ATP 速率测定 » XF ATP 速率指数）：当前可在 XF ATP 速率测定小组件列表中找到 XF ATP 速率指数。XF ATP 速率指数小组件以空心圆标记绘制基础线粒体呼吸 ATP 产生速率与基础糖酵解 ATP 产生速率的比值，并以实心圆标记绘制每组的诱导线粒体呼吸 ATP 产生速率平均值与诱导糖酵解 ATP 产生速率平均值的比值（仅当应用于诱导分析结果文件时 — 下图所示小组件显示了诱导 XF ATP 速率测定的数据）。另请注意，必须为检测液、背景孔和实验组分配正确的缓冲系数，然后才能计算该小组件数据。

5.5 导出和共享数据

将您的数据导出为 Microsoft Excel 或 GraphPad Prism 文件，或使用 Seahorse Analytics 与合作者直接共享您的结果数据和见解。

数据导出：

有几种方法可以将 Seahorse Analytics 中的数据导出为 Microsoft Excel、GraphPad Prism 或图像文件。

导出所有速率数据

可以创建包含所选文件的所有速率数据的 Excel 和 Prism 文件。该导出不包括已在分析视图中计算的任何参数计算值（如备用呼吸能力），您将需要从各小组件单独导出这些数据。

如何使用该导出功能？这种类型的数据导出使用户能够轻松地将所有速率数据（OCR、ECAR 和 PER 数据）传输到 Prism 或 Excel 中，以创建高质量或自定义数据图、执行统计分析以及 Seahorse Analytics 未提供的其他分析功能。

从各个小组件导出选定的数据：您可以将选定的各个小组件中的数据导出到 Excel 和 Prism 文件中。导出文件中的数据将完全按照小组件中设置的格式显示。例如，如果将小组件配置为在 well（孔）模式下显示基础呼吸，则 Prism 导出文件将包含各组各个孔的基础呼吸数据。如果将小组件配置为在 group（组）模式下显示基础呼吸，则 Prism 导出文件将显示组平均值和误差值，而不是单个孔的数值。

如何导出所有速率数据：

1. 在任意分析视图或小组件编辑器视图中，找到小组件右上角的小云朵按钮。
2. 将鼠标移动到云朵按钮上可显示 Image（图像）和 Data（数据）导出选项。
3. 将光标滑动到 Image（图像）上方以将小组件导出为 PNG 或 JPG 文件，或滑动到 Data（数据）以将小组件导出为 Excel 或 Prism 文件。
4. 导出文件中的数据将完全按照小组件中设置的格式显示。在此示例中，Prism 导出文件包含孔板上两个组的每孔基础呼吸值。

如何使用该导出功能？此类型的数据导出使用户能够将所选速率或参数数据轻松导出为图像文件，或者导出为 Prism 或 Excel 文件。Prism 和 Excel 导出使您可以准确获取想要进一步分析的数据（例如用于创建高质量或自定义数据图、执行统计分析以及 Seahorse Analytics 未提供的其他分析功能），而不是导出所有数据，然后再尝试找到所需要的具体信息。

如何使用该共享功能？共享功能允许您直接通过应用程序向具有或不具有 Seahorse Analytics 账户的人发送分析结果文件。您选择共享的分析结果文件将在收件人的账户中创建一个该数据文件的副本，小组件布局、选择和分析视图与共享文件之前您设置的格式完全相同。收件人可以对共享文件进行修改，但您这边的文件将保持不变。

这一部分重点介绍了使用 Wave Desktop 和报告生成器软件查看并分析检测结果数据。如需显示 Seahorse Analytics 的帮助内容，请点击此处。

Wave Desktop 是用于任意 XF、XFe 和 XFp 分析仪生成的结果文件的数据分析软件。使用 Wave Desktop 的灵活分析视图、内置报告工具和其他强大的分析功能，可以将复杂的细胞代谢数据转化为可发布的结果。

XF 报告生成器是 Microsoft Excel 宏文件，可自动计算每个 Seahorse XF 检测试剂盒的参数，并将结果数据呈现在一页纸的定制总结报告中。

选择以下主题了解更多信息：

5.1 电脑性能指标与兼容性

5.2 数据类型

5.3 数据显示选项

5.4 分析视图

5.5 XF 报告生成器

5.1 电脑性能指标与兼容性

Wave Desktop 是一款适用于所有 Seahorse 分析仪的实验设计和数据分析软件，支持：

• 对所有 Seahorse 分析仪（XFe96、XFe24、XFp、XF96 和 XF24）的数据文件进行分析。
• 为 XFe96、XFe24 和 XFp 分析仪创建并定制分析模板。
• 将数据导出至 (1) Microsoft Excel、(2) GraphPad Prism 或 (3) XF 报告生成器。
• 支持 Windows 和 Macintosh 电脑的 Microsoft Excel（32 位和 64 位）。

建议更新到 Wave Desktop 软件最新版本。Wave Desktop 软件的最新版本是 2.6.1 版（2019 年 4 月）。Wave Desktop 软件可安装在采用 Windows 7 或更高版本操作系统的任意电脑上。

以下是 Wave Desktop 2.6 软件的电脑性能指标和兼容性详情：

计算机	性能指标
Windows PC	操作系统：Windows 7、8.1 和 10
	处理器：Intel Core i3（或更高配置）
	硬盘空间：175 GB
	系统内存 (RAM)：4 GB（最小*）
	屏幕分辨率：1280 × 800（最小）
	支持的 Excel 版本：2010、2013 和 2016
Macintosh 电脑（需要使用虚拟机）	操作系统：Mac OSx 10.11 或更高
	虚拟机：Parallels 12 与 Windows 7、8.1、10
	处理器：Intel Core i3（或更高配置）
	硬盘空间：175 GB
	系统内存 (RAM)：4 GB（最小*）
	屏幕分辨率：1280 × 800（最小）
	支持的 Excel 版本：2011 和 2016

* 推荐使用 8 GB（或更大）系统内存 (RAM)，以获得更出色的软件体验。

5.2 数据类型

细胞耗氧量（呼吸）和质子分泌（糖酵解）导致溶解氧和游离质子的浓度发生快速且易测量的变化。安捷伦 Seahorse XF 分析仪可通过分离微孔板中单层细胞上极小体积（约 2 µL）的检测液，实时测量溶解氧和自由质子浓度，然后分别计算出 OCR 和 ECAR。

利用 Wave Desktop 软件，您可以轻松获得并查看以下数据：

XF 分析仪的主要输出是速率数据。

水平数据用于计算速率数据，也可用于诊断目的。

5.3 数据显示选项

Wave 提供了一组用于查看并解析实验结果数据的标准图形选项。Wave 可根据所选的分析视图类型自动计算，并将结果数据以如下方式图形化：

动力学曲线

动力学曲线是显示 XF 分析仪速率数据最常用的一种方法。动力学曲线的 y 轴表示速率，x 轴表示时间。在分析过程中，采集的数据将实时绘制成动力学曲线。动力学曲线可以在 Wave 软件的快速视图和概览分析视图中找到。

能量图

另一种绘制 XF 结果数据的常见方法是能量图（散点图），其中 y 轴通常表示耗氧量 (OCR)，x 轴常表示酸化数据（ECAR 或 PER）。使用“测量”下拉菜单选择速率测量值，以显示每组的能量图。使用“速率”下拉菜单将 x 轴的速率改为 PER。可以在快速视图和 OCR 与 ECAR 分析视图中找到能量图图形选项。

板布局

板布局很好地显示了每个实验孔选定速率测量的速率数据。在分析过程中，板布局通常显示在 Wave 的右上角，也可在快速视图、概览以及 OCR 与 ECAR 分析视图中找到。快速视图中有一个显示板布局的按钮，默认为隐藏状态。

Quick View（快速视图）和 OCR vs. ECAR（OCR 与 ECAR）分析视图中的板布局显示了两种速率：耗氧率（OCR — 顶部）和酸化数据（ECAR 或 PER — 底部）。Overview（概览）分析视图中的板布局显示了一种速率 — OCR、ECAR 或 PER。

打开一个新的分析视图时，板布局默认显示速率测量 1 的数据。在分析过程中，可使用“速率”下拉菜单显示另一个速率测量的数据。

条形图

Bar Graph（条形图）仅在概览分析视图（板布局下方）中可见，显示的是所选测量的每组平均速率。使用 Display（显示）下拉菜单将速率显示从组（平均）变为孔（单个孔）模式。

条形图可用于确定异常值、最佳 FCCP 浓度、最佳细胞接种密度，或在测量数据绘制成动力学曲线或散点图时可能不明显的其他趋势。

组列表

组列表是动力学曲线或散点图中绘制数据的图例。

使用组列表可以：

• 双击组名隐藏或显示各组的数据图。
• 勾选组列表右上角的 Details（详情）框可显示组统计数据。统计数据显示为所选速率测量的平均值和误差。选择不同的速率测量可显示该速率的组统计数据。
• 板布局中关闭的实验孔不包括在计算的组统计数据中。
• 隐藏某个组时，该组的平均值和标准偏差为：平均值 0.00；标准偏差 0:00。

参阅 Wave 用户指南第 3 章，了解关于 Wave 软件可用数据类型的更多信息。

5.4 分析视图

4 个可定制的分析视图可添加到 Wave Desktop 的分析结果文件中。使用顶层功能区菜单中的 Add View（添加视图）按钮，将每个分析视图多次添加到一个分析结果文件中。

快速视图

Quick View（快速视图）是打开一个新的分析结果文件时显示的默认分析视图。快速视图同时显示 OCR 与时间的动力学曲线、ECAR 与时间的动力学曲线，以及 OCR 与 ECAR 的能量图。

概览

Overview（概览）显示速率（OCR、ECAR、PER 或 PPR）与时间的动力学曲线。y 轴显示所选速率，x 轴显示时间。勾选动力学曲线图下 Group List（组列表）中的 Details（详情）框可显示每个测量的组统计数据（平均速率与误差）。概览是 Wave 软件中用于常规分析功能最通用的分析视图。如需显示概览，点击 Add View（添加视图）并从视图列表中选择 Overview（概览）。

技巧：重复 Add View > Overview（添加视图 > 概览）过程可添加多个“概览”分析视图。这为自定义结果数据呈现方式，以显示特定组、响应或组之间的对比提供了更大的灵活性。

OCR 与 ECAR

OCR vs. ECAR（OCR 与 ECAR）视图显示了一个能量图，其中 y 轴为 OCR（默认），x 轴为 ECAR。利用“速率”下拉菜单可将 x 轴显示的速率更改为 PER 或 PPR。y 轴通常显示 OCR，无法修改。如需显示 OCR 与 ECAR，点击 Add View（添加视图）并从视图列表中选择 OCR vs. ECAR（OCR 与 ECAR）。

数据

Data（数据）视图包含与分析结果文件相关的所有数据，分为 7 个选项卡：

• Group Data（组数据）：每组的平均速率数据（OCR、ECAR、PER 或 PPR）和误差，按测量编号排序。
• Rate（速率）：按测量编号排序的单孔速率数据（OCR、ECAR、PER 或 PPR）。不显示误差值。
• Level Data（水平数据）：按测量编号排序的各个孔的水平数据（O₂ 和 pH）。
• Raw（原始数据）：原始测量数据，包括每次测量记录的 O₂ 和 pH 光发射值、参考值、孔和环境温度。该选项卡最常用于技术支持，而非常规数据分析。
• Calibration（校准）：每孔的 O₂ 和 pH 校准结果。
• Calibration View（校准视图）：每个实验孔的 O2 和 pH 校准结果，显示为板布局。
• Event Log（事件日志）：分析仪序列号、软件版本、板与条码批号等分析信息以及分析期间的其他设置。还提供了 XF 分析时使用的方案命令可排序表格，包括命令名称、时间和结果。

如需显示数据视图，点击 Add View（添加视图）并从视图列表中选择 Data（数据）。打开数据视图时，默认显示组数据选项卡。

参阅 Wave 用户指南第 3 章，获取关于每个分析视图的详细信息，包括将数据重新计算为基线百分比、将速率数据归一化为生物学参数（即细胞数量）、在板布局上标记实验孔，以及其他关键分析功能和特征。

5.5 XF 报告生成器

安捷伦 Seahorse XF 报告生成器是 Microsoft Excel 宏文件，可自动计算每个 Seahorse XF 检测试剂盒的参数，并将结果数据呈现在一页纸的定制总结报告中。

Wave 可一键式直接将结果数据导出至 XF 报告生成器，Wave 中对结果数据的任意修改（如排除的实验孔或归一化速率数据）都将包含在导出和分析的报告生成器 Excel 文件中。单击顶层功能区菜单中的 Export（导出）选项，可显示可用的 XF 报告生成器导出选项列表。

为何使用 XF 报告生成器？

• 更高效、更一致的数据分析 — 将原始动力学数据转化为可解析的结果，避免重复的手动计算和数据处理。
• 几秒内总结出 XF 结果数据 — 以有序、可定制、易于理解的报告形式呈现数据。
• 可扩展以满足您的分析需求 — 使用多文件 XF 报告生成器一次性导入并分析最多 5 个重复结果文件。
• 协作更简单 — 无需任何特殊软件程序或许可，即可查看并重新分析报告生成器中的结果数据。
• 支持以下分析：
  • 在 Seahorse XFe、XF 和 XFp 分析仪上生成的数据文件。
  • Windows 电脑上的 Microsoft Excel 2010、2013 和 2016。
  • Apple 计算机上的 Mac 2011 和 2016 Excel。

XF 报告生成器 — 下载页面	单文件分析	多文件分析
Seahorse XF 细胞能量代谢表型测试	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 细胞线粒体压力测试	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 实时 ATP 速率测定	单文件用户指南	不适用
Seahorse XF 糖酵解速率测定	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 线粒体底物分析	单文件用户指南	不适用
Seahorse XF 糖酵解压力测试	单文件用户指南	不适用

XF 学习中心的这一部分将介绍关于 XF 分析仪使用的各种主题，包括一系列 XF 检测试剂盒及应用，其他分析条件和样品类型，以及 XF 数据的归一化和分析。

选择以下主题了解更多信息：

6.1 XF 试剂盒与应用

6.1 XF 试剂盒与应用

6.2 XF 数据的归一化

6.2 脂肪酸氧化实验

6.3 透化细胞与分离的线粒体

6.3 透化细胞与分离的线粒体

6.4 缺氧和细胞球体

6.4 缺氧和胰岛

6.1 XF 分析与应用

安捷伦 XF 检测试剂盒和试剂专用于 XF 分析仪，可确保结果的可靠性和一致性。Seahorse XF 试剂盒和试剂通过提供预校准、预测试过的试剂，来简化 XF 分析的运行，用于测定有价值的功能代谢参数，包括细胞 ATP 产生速率、线粒体功能、糖酵解活性，以及活细胞、透化细胞和分离的线粒体中的底物氧化。

注：所有 XFp 检测试剂盒和消耗品均与 XF HS Mini 分析仪兼容。

以下材料提供了进行各种 XF 分析的信息和方法。