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安捷伦寡核苷酸色谱解决方案

从实验室研究到生产规模,从 QA/QC 到生产制造

页面标题 | 安捷伦

轻松满足各种分离和纯化需求:从 siRNA 到 mRNA

安捷伦了解寡核苷酸的多样性,通过提供理想填料助您实现出色的分离度、重现性和长色谱柱寿命。

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安捷伦寡核苷酸分离和纯化指南

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寡核苷酸信息图

核酸表征

Agilent AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱拥有高效的 2.7 μm 和 4 μm 表面多孔 Poroshell 颗粒填料。采用安捷伦独特的技术对颗粒填料进行化学修饰,使其可耐受高 pH 的流动相。这样可以提供更好的分离和变性条件,从而实现理想的分离度和寡核苷酸分离。我们还将这些填料与封端 C18 固定相键合,从而为寡核苷酸的分析提供出色的选择性,是 LC/UV 和 LC/MS 表征工作流程的理想选择。另外,还采用分离度标准品对每一批 AdvanceBio 寡核苷酸填料进行了测试,确保其具有一致的性能。

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离子对反相纯化

安捷伦提供两种不同的颗粒填料,支持寡核苷酸的离子对反相 (IP-RP) 分析。

AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱系列拥有高效、高分离度的表面多孔颗粒填料,有 2.7 μm 和 4 μm 两种粒径,孔径为 100 Å。它是一款全面可扩展的色谱柱填料平台,提供从分析级到 10 mm 内径半制备型和 21.2 mm 内径制备型的各尺寸产品。对于短合成寡核苷酸的高分离度分离而言,AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱填料是理想的选择。

Agilent PLRP-S 聚合物填料的理化性质非常稳定,因此非常适合 IP-RP 寡核苷酸纯化所需的苛刻流动相条件。PLRP-S 提供从分析级到 100 mm 内径制备级的各种粒径填料颗粒(3 μm 至 30 μm)和孔径(100 Å 至 4000 Å),是较长寡核苷酸序列(如 mRNA)或大规模制备纯化的理想选择。

这两款安捷伦色谱柱组合能够独特地支持您从早期发现到工艺规模纯化的所有寡核苷酸 IP-RP 分离工作流程需求。

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使用安捷伦寡核苷酸色谱柱轻松放大至纯化级别

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过去数十年来,人们一直对在 RNA 甚至 DNA 水平上调节蛋白表达的新治疗方式感兴趣和关注。由于 API 和杂质的高度相似性,寡核苷酸 (ON) 的纯化充满挑战性。

安捷伦充分了解每种寡核苷酸 API 纯化所面临的独特挑战,通过提供一系列填料、孔径和尺寸来满足您的需求。

阴离子交换纯化

Agilent PL-SAX 色谱柱提供 1000 Å 和 4000 Å 全多孔颗粒填料,非常适用于寡核苷酸药物的纯化,使用常见的缓冲液(如 Tris-HCl)和有机改性剂进行 gRNA 分离,或使用强碱性条件分离硫醇化寡核苷酸的氧化杂质。

与传统的硅胶和小孔径填料不同,PL-SAX 能够提供分离各种大小和具有各种修饰的寡核苷酸所需的 pH 稳定性和温度稳定性,以及理想的孔径。

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推出用于脱盐和缓冲液交换的 AdvanceBio 离心柱和 96 孔样品板

采用 Agilent AdvanceBio Spin 离心柱和多孔板,用户可轻松而快速地从样品基质中去除过量的盐或不需要的小分子(例如合成副产物),或在不同缓冲液条件下交换样品基质。

这些基于凝胶过滤的离心柱可用于单个样品的分析规模和半制备规模色谱柱,以及用于高通量设置的 96 孔样品板。色谱柱床在所有三种规格中均含有相同的交联葡聚糖颗粒,因此用户可以很轻松在样品数量或体积上放大或缩小。

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工具和资源

快速学习

合成寡核苷酸经过不断发展,现已包含各种各样的寡核苷酸分子,它们在大小、结构和修饰方面存在极大的差异。这种多样性会导致出现许多与母体分子高度同源的合成相关杂质。这一系列免费培训单元介绍了寡核苷酸纯化的理论,通过多个视频介绍了填料选择、方法优化、规模放大和 API 表征。

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工作流程订购指南

这些工作流程订购指南可以帮助您为分析快速选择和订购合适的色谱柱、标准品、试剂和备件。

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生物液相色谱柱 eSelector 工具

不确定哪种色谱柱更适合您的分析?使用我们的 eSelector 工具,只需轻点几下即可快速找到合适的色谱柱。您可以按固定相、应用或其他供应商的货号进行搜索。

网络研讨会

通过我们的寡核苷酸闪电讲座网络研讨会系列快速获取知识

访问我们的 AdvanceBio 网络研讨会系列页面,随时观看各种网络研讨会录像。

免费培训单元

这一系列培训单元介绍了寡核苷酸纯化的理论,通过多个视频介绍了填料选择、方法优化、规模放大和 API 表征。

第 1 单元 — 前言:设计方法

第 2 单元 — 杂质谱

第 3 单元 — 寡核苷酸大小和孔径选择

第 4 单元 — 阴离子交换方法优化

第 5 单元 — 离子对反相优化

第 6 单元 — 合成寡核苷酸的 LC/MS 分析

产品样本

AdvanceBio — 推进您的寡核苷酸工作流程:从分析级到半制备级和制备级应用,Agilent AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱、软件和仪器都可以无缝配合,大幅减少方法优化和停机时间。

寡核苷酸纯化解决方案:Agilent PLRP-S 和 PL-SAX HPLC 色谱柱

视频

信息图

完整的工作流程,将推进候选寡核苷酸从发现到上市的进程

安捷伦可提供完整工作流程,包括针对寡核苷酸分析进行优化的仪器、软件、色谱柱和消耗品。此外,安捷伦可以帮助您按照 GMP 要求生产后期及商业化规模的寡核苷酸。

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应用

Agilent PLRP-S 聚合物填料提供一系列粒径和孔径供选择。从实验室研究到生产规模,PLRP-S 可根据您的需求进行扩展。

规模放大

规模放大

使用高效液相色谱纯化单链 RNA 寡核苷酸

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色谱柱尺寸

寡核苷酸在 PLRP-S 柱和固定相上的动态结合容量

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纯化产品系列

安捷伦核酸纯化产品系列

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应用

方法优化

本应用简报介绍了在纯化包含 25–100 个碱基的寡核苷酸时可以优化的常用方法参数。

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经修饰寡核苷酸的分离

使用 PL-SAX 强阴离子交换 HPLC 色谱柱对寡核苷酸进行高分离度分离

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AEX 色谱柱对比

本应用简报对比了 Bio SAX 和 PL-SAX。Bio SAX 是高分离度纯化的理想选择,而 PL-SAX 是高结合能力的理想选择。

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合成寡核苷酸经过不断发展,现已包含各种各样的寡核苷酸分子,它们在大小、结构和修饰方面存在极大的差异。这种多样性会导致出现许多与母体分子高度同源的合成相关杂质。

这一系列免费培训单元介绍了寡核苷酸纯化的理论,通过多个视频介绍了填料选择、方法优化、规模放大和 API 表征。

前言:设计方法

第 1 单元讨论了优化纯化方法时应考虑的一系列变量,包括产量、分离度和通量。

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杂质谱

合成寡核苷酸的大小可以从几个碱基到几千个碱基不等。寡核苷酸可能有许多与合成相关的杂质,包括截短、不完全硫醇化、碱基缺失和加合物。我们探讨了为获得纯 API 需要纯化的多种杂质。

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寡核苷酸大小和孔径选择

用作治疗药物的寡核苷酸大小各异,因此选择合适的孔径以提供更高的结合容量,并确保该孔径足以实现有效的传质至关重要。本单元介绍了如何通过动态结合容量实验来确定用于寡核苷酸纯化及未来规模放大的理想孔径。

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阴离子交换方法优化

阴离子交换 (AEX) 因缓冲体系成本较低,易于扩大至生产规模,通常被视为首选纯化方法。本单元讨论了通过调整温度、有机物和 pH 等常见变量来优化 AEX,从而改善分离。

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离子对反相优化

离子对反相分离常用于寡核苷酸表征和纯化。离子对反相可提供高分离度分离,常用于分离具有挑战性的共洗脱杂质。本单元讨论了方法优化,包括温度、孔径、离子对选择以及未来的规模放大。

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合成寡核苷酸的 LC/MS 分析

在寡核苷酸合成、纯化和获得最终制剂的整个过程中,监测 API 的最终纯度至关重要。本单元介绍了使用 LC/MS 进行寡核苷酸表征,包括选择理想的离子对和六氟异丙醇 (HFIP) 浓度。

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