Access Agilent 电子期刊，2015 年 10 月
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创新的质谱设计加速复杂基质中的药物定量
作者：Craig P. Love，Behrooz Zekavat，Patty Sun
安捷伦质谱部门
在药物开发过程中，需要许多体外和体内方法筛查有待进一步开发的潜在候选药物。由于基质组分的存在，代谢物的体内鉴定和定量分析面临着严峻的挑战。这些研究需要使用灵敏、稳定的分析技术，以实现候选药物的高通量筛查。最常用的分析方法是采用多反应监测 (MRM) 模式下的三重四极杆质谱仪。然而，这类系统的分析性能会随着不挥发性样品基质组分在离子源和离子迁移光学系统中的积聚而逐渐下降。因此，为了维持最佳性能就可能需要频繁清洗系统。
稳定的分析性能
在研究药物定量分析挑战的过程中，我们评估了 Agilent 6470 三重四极杆 LC/MS 联用 Agilent RapidFire 365 高通量质谱系统的分析稳定性。对于药物开发组织来说，Agilent RapidFire 365 可实现自动的高容量样品分析，是高通量筛查复杂药物靶标的成功方法。相比质谱分析法，如体外 ADME 分析，RapidFire 365 的分析通量要高出 10 倍。
Agilent 6470 三重四极杆 LC/MS 解决方案采用多项关键的创新性设计，能够在较宽的线性动态范围内对复杂样品基质中的目标分析物进行灵敏、精密而稳定的定量分析。这些创新包括：
- 经过优化的离子光学元件和前级过滤器几何尺寸，可在增加离子传输的同时最大程度减少污染
- 弯曲的圆锥形六极杆碰撞池，可实现高效的 MS/MS 碎裂与离子传输
- 具有高能量转换打拿极和低噪音特性的离子检测器，能够在宽 m/z 范围内实现高效的正离子与负离子检测
在该研究中，我们使用了 Agilent 6470 三重四极杆 LC/MS 和 Agilent RapidFire 365 HTMS 组合，测试了分别加入 5 ng/mL 阿普唑仑、氯氮平及其相应内标（分别为阿普唑仑-D5 和氯氮平-D4）混合物的沉淀猪血浆。使用三倍体积的乙腈沉淀猪血浆，然后在 13500 rpm 的转速下离心 5 分钟。在加入分析物和内标之前，上清液要用水稀释到 10 倍体积。将加标血浆样品转移至 96 孔微量滴定板中，并在进行 RapidFire/MS 分析之前使用 Agilent PlateLoc 微孔板热封膜机将其密封。
优化 Agilent RapidFire 365 HTMS 参数，以获得 RapidFire 清洗溶剂条件。清洗溶剂 1（缓冲液 A，流速 1.50 mL/min）为水 + 2 mM 乙酸铵 + 0.1 % 甲酸溶液。清洗溶剂 2（缓冲液 B，流速 1.25 mL/min）为 20% 乙腈 + 10 mM 乙酸铵 + 0.1% 甲酸溶液。使用流速为 1.25 mL/min 的洗脱溶剂（缓冲液 C，75% 乙酸乙酯甲醇溶液），从 RapidFire Type A (C4) 小柱中洗脱分析物。
该系统配置可连续 5 天（2000 次进样/天）以每个样品约 15 秒的速度分析血浆中的小分子药物。图 1 展示了将每种分析物进样 50 pg 得到的阿普唑仑和氯氮平的峰面积比与 RapidFire 进样次数之间的关系（总进样 10000 次）。系统在 10000 次进样中表现出了稳定的峰面积比，表明 Agilent 6470 三重四极杆 LC/MS 具有稳定的分析性能。
10000 次样品进样开始和结束时药物的重叠 MRM 色谱图见图 2。10000 次进样后，阿普唑仑和氯氮平的峰形和峰面积（峰高）均未改变。
很显然，Agilent 6470 三重四极杆 LC/MS 的创新性离子迁移光学系统设计，能够最大程度地减少样品积聚带来的不良影响，为沉淀血浆样品中目标候选药物的超高通量分析提供了稳定的分析平台。
该研究的更多详细信息可参阅免费提供的安捷伦出版物 5991-5953CHCN。
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