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Access Agilent 电子期刊，2016 年 3 月

多中心切割二维液相色谱的演变：
Agilent 1290 Infinity II 可提供高分离度取样和轻松定量分析

Ulrich Eberhardinger 和 Jens Trafkowski，安捷伦液相分离业务部产品经理

多中心切割二维液相色谱已成为分析中等到高度复杂样品的有用工具。该技术采用两种不同的分离机制以提高分离度和峰容量。但是许多科学家希望将二维液相色谱的功能扩展至宽峰分析，并在两个维度上均获得最优的分离度，而解决方案正是高分离度取样。

高分离度取样提供了两种二维液相色谱技术的优势

迄今为止，科学家需要从两种互补的二维液相色谱模式中进行选择：中心切割二维液相色谱和全二维液相色谱。

中心切割二维液相色谱能够详细分析第一维所作的短切割并使用较长的梯度以在第二维获得最高的分离度。多中心切割二维液相色谱增加了保存多个峰的能力，并且能够使第二维的运行时间不受制于第一维的运行时间。该技术与单中心切割二维液相色谱相比，能够分析包含更多目标化合物的样品。

全二维液相色谱将所有流出物从第一维转移至第二维。它最适合分析在第一维中包含大量目标区域的高度复杂样品或未知样品。整个二维分析时间通常为 20 至 40 秒，包括色谱柱再平衡，其等于在第一维保存切割所用的时间。因此，该技术要求在第二维采用快速梯度并且在第一维采用相对较长的切割。这种依赖性限制了两个维度的分离度：

  • 将可能已在第一维得到分离的化合物储存到样品定量环中并重新混合，然后转移至第二维，这样会导致取样不足的问题[1]
  • 第二维的快速梯度可能使您无法获得最出色的二维分离度

图 1. 高分离度取样能够很好地分离大主峰旁边的两个低浓度杂质

在两个维度均获得优异的分离度

高分离度取样结合了中心切割与全二维液相色谱的优势。可在第一维定义最多 10 个连续切割，并以多中心切割一样的方式进行保存。在安捷伦二维液相色谱软件中可轻松、灵活地设置切割。

高分离度取样能够分析第一维中较大的目标区域或较宽的未分离色谱峰（图 1）。它可以使用低至约 3 µL 的小切割，其对应于切割长度小于 1 秒的保留时间差（取决于一维流速）。与全二维液相色谱测量不同，它保留了第一维获得的分离度，并且允许在第二维使用较长的运行时间。

优于单个大样品环

传统方法中二维液相色谱用户采用单个大定量环中对大色谱峰进行切割，而非使用多个小样品环。大样品环具有几点不足：

  1. 大体积样品环由于取样不足，一维分离度会受到不利影响[1]。
  2. 大样品体积被转移至第二维可能导致二维色谱柱过载。
  3. 转移具有高洗脱强度的大体积溶剂可能对第二维的分离产生不利影响。

因此，高分离度取样是一种比增加样品定量环尺寸更优的选择。

图 2. 多切割样品的定量数据分析使用峰分组和面积求和

图 3. 利用安捷伦二维液相色谱校验样品中的两种化合物进行校准，高分离度取样二维液相色谱在两个波长下均提供了优异的线性

通过峰面积总和进行可靠的定量分析

高分离度取样还可提供精确、可重现的二维液相色谱定量分析结果，因为色谱峰的全部样品体积均被转移至第二维。由于色谱峰被分为多个切割，因此安捷伦二维液相色谱软件可在第二维中自动分组连续切割，并对具有相似保留时间的所有化合物的峰面积求和（图 2）。结果使用峰面积总和实现了非常可靠的定量分析[2]。请参见实例表 1 。

化合物 1 2 3 4 5
RSD% 2.8% 1.9% 1.6% 1.6% 0.5%

表 1. 对校验样品中的化合物进行 20 次连续分析得到了优异的峰面积重现性

如图 3 所示，由这些二维液相色谱测量所得的校准结果表现出非常出色的线性，已分离色谱峰的相关系数 (R2) 大于 0.999。

全新的具备多中心切割技术的 Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱提供了完整的解决方案，其中包括即拆即用的硬件和全套软件，以便轻松设置方法、快速进行定性数据评估以及平稳地定量分析数据。借助这一解决方案，二维液相色谱变得更易于使用，可提供更出色的性能，并且适用于每一位分析化学家。

安捷伦提供了完整的系统校验和专门的二维液相色谱培训，确保您在优化液相色谱分离时取得成功。

要了解更多信息，请观看视频，了解关于采用多中心切割的全新 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案。

参考文献

  1. Davis, J.M., Stoll, D.R., Carr, P.W., Effect of First-Dimension Undersampling on Effective Peak Capacity in Comprehensive Two-Dimensional Separations, Anal. Chem., 2008, 80, 461-473, doi: 10.1021/ac071504j.
  2. Buckenmaier, S., Agilent 1290 Infinity 多中心切割二维液相色谱解决方案，安捷伦技术概述 5991-5615CHCN

Figure 1

高分离度取样能够很好地分离大主峰旁边的两个低浓度杂质。

图 2

多切割样品的定量数据分析使用峰分组和面积求和。

图 3

利用安捷伦二维液相色谱校验样品中的两种化合物进行校准，高分离度取样二维液相色谱在两个波长下均提供了优异的线性。