Access Agilent 电子期刊，2016 年 2 月

全新 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱可简化 mAb/ADC 分析

Linda Lloyd
安捷伦生物色谱柱产品经理

M. Sundaram Palaniswamy
安捷伦生物色谱柱应用科学家

治疗性蛋白质容易在生产过程中（例如表达、再折叠、下游处理、制剂、灭菌和储存）发生聚集和降解。作为开发新型生物治疗药物的一部分，必须确定发生聚集的可能性并且定量分析所有生产阶段中聚集体的量。单克隆抗体的结构和形态将影响形成聚集体的可能性，因此，对于为形成 ADC（抗体-药物偶联物）而连接的疏水性有效载荷，聚集特征将发生改变，因为改性会提高由疏水性造成的聚集现象的发生。尽管聚集体或降解产物的含量极低，但它们仍可对生物药物产生严重影响。因此，小的聚集体会引起免疫反应，而大的聚集体、颗粒物则会在用药时导致不良事件。

体积排阻色谱 (SEC) 是用于表征蛋白质聚集体的标准方法。然而，在进行聚集体、单体、二聚体和更高分子量聚集体的 SEC 定量分析时，确保样品组成不受流动相影响非常的关键。由于环境条件会改变聚集体的浓度，因此必须确保在含有低浓度盐的中性 pH 水相流动相中完成 SEC 分离。多数利用水相进行 ADC 的 SEC 分析的已发布方法会导致较差峰形以及对单分子偶联物聚集体的不完整分离。疏水性有效载荷与固定相之间的非特异性相互作用会导致这一现象。

安捷伦的突破性技术

安捷伦科学家开发出一款新型生物色谱柱，该色谱柱克服了用于分离和定量分析治疗性 mAb 与 ADC 的标准 SEC 的缺陷。 Agilent AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱的设计和制造采用创新型硅胶填料和特有的键合技术。

图 1. 使用 Agilent AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱获得的天然（红色迹线）曲妥单抗与 pH/热应激曲妥单抗的叠加色谱图

图 2. 使用 Agilent AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱获得的天然（红色迹线）ADC 与 pH/热应激 ADC 的叠加色谱图

这项突破性技术可使各种样品均获得出色的分离度和体积分离，且无需向流动相中添加有机改性剂。另一个优势在于用户可采用同一流动相与色谱柱分析 ADC 和 mAb，而无需像传统 SEC 方法那样进行切换。

您可以在天然与 pH/热应激曲妥单抗的比较结果中看到使用 SEC 监测降解现象的优势（图 1）。单体聚集为二聚体和少量更高分子量聚集体。 图 2 显示了对 ADC 样品的相同比较。显然，该新型色谱柱在样品经 pH/加热处理后能够分离聚集体，并显示其不同的特征。使用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱和相同的色谱条件提供了有关 mAb 改性前后的聚集程度和聚集体尺寸的重要信息。

一种简单的生物制药 QA/QC 方法

经 pH/加热诱导的聚集体色谱图表明，AdvanceBio SEC 色谱柱能够分离和检测聚集体以及降解的曲妥单抗和 ADC。完整态、聚集体和降解物彼此之间都具有良好的分离度。该方法操作简单且具有良好重现性，与 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱的生物惰性和抗腐蚀性结合后非常适用于生物制药行业中单克隆抗体/ADC 的 QA/QC 分析。

如需了解本研究的全部详情，请参阅免费提供的安捷伦出版物 5991-6303CHCN。

安捷伦提供了各种有助于简化工作流程的生物制药解决方案

安捷伦提供了许多资源和产品，能够帮助您分离、鉴定和定量分析生物制药产品中的聚集体及片段。

例如，用于 SEC 的 Agilent BioHPLC 色谱柱能为生物制药分析提供快速、可靠、准确的性能。这些色谱柱可以很轻松地融入您的工作流程中，并且为您提供各种孔径和规格选择。30 多年来，安捷伦已成为 SEC 色谱柱和仪器领域的领先制造商。了解我们的系列生物分析解决方案和液相色谱生物柱，然后立即联系安捷伦客户服务中心，了解我们的解决方案如何能够加快您的工作流程并缩短新型生物治疗药物的上市时间。