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对乙酰氨基酚，又叫扑热息痛，是广泛用于缓解疼痛和退热的常见药品。对乙酰氨基酚的样品前处理和分析在美国药典 (USP) [1] 中有明确规定，并且可以使用不同的 HPLC 系统，以及来自不同厂商的色谱柱和样品前处理产品。但是，当您使用的 HPLC，以及消耗性的 HPLC 部件和备件来自不同的供应商时，情况又会如何？

为了回答这个问题，我们使用 Agilent Poroshell 120 色谱柱和 Waters Alliance HPLC 系统，配备有用于泵和自动进样器的 Agilent CrossLab 性能维护包，以及 Agilent CrossLab 氘灯，针对对乙酰氨基酚片进行了 HPLC 分析和方法学验证。结果显示，该方法具有良好的线性、精度和样品回收率，表明用于 Alliance 系统的安捷伦备件可以很好地替代沃特世部件。

结合了沃特世和安捷伦产品的混合系统

我们使用 Waters Alliance 分离模块（型号 2695）和沃特世 UV-Vis 检测器（型号 2487）进行 HPLC 分析。该系统配备了 Agilent CrossLab 氘灯，以及来自 Agilent CrossLab 性能维护包的部件，包括柱塞杆、柱塞杆密封圈、扩散器、面密封垫、溶剂过滤器、注射器、柱前过滤器、单向阀阀芯、针头清洗滤芯、针头组件和进样器密封垫等。光谱数据通过 Waters Acquity 光电二极管阵列 (PDA) 检测器获得。

参数	数值
色谱柱	Agilent Poroshell 120 EC-C18，4.6 × 75 mm，2.7 µm（部件号 697975-902）
流动相	1:3 甲醇:水，等度洗脱
样品溶解/稀释溶液 (DDS)	1:3 甲醇:水
流速	1.5 mL/min
柱温	25 ℃
紫外检测	243 nm
进样体积	10 µL
其他安捷伦备件
注射式过滤器	Agilent Captiva 优级注射式过滤器，带有孔径 0.45 µm 的再生纤维素膜（部件号 5190-5111）
样品瓶	棕色，带书写签，100/包（部件号 5182-0716）
样品瓶盖	蓝色螺纹口盖，100/包（部件号 5182-0717）

表 1. 在沃特世液相色谱上使用安捷伦色谱柱、灯和备件对对乙酰氨基酚片进行稳定分析的条件

系统的认证测试证明了结果的可靠性

在 Alliance HPLC 系统上安装了安捷伦部件和氘灯后，我们首先通过测试认证了该系统，包括泵的流量准确度、波长准确度、信号噪音和漂移、进样精度、交叉污染、咖啡因标准品的响应线性，以及梯度组成的准确度。所有测试均获通过并得到了良好的结果，表明系统功能完全正常。

然后，我们根据 USP 方法 [1] 分析了对乙酰氨基酚标样及其片剂样品，并对方法进行了验证。鉴于安捷伦应用简报 5991-6017EN 包含了结果的全部详细信息，本文只提供一些令人关注的亮点。

用于可靠定量分析的线性校准曲线

该混合系统实现了 0.05 - 20 µg/mL 浓度范围内对乙酰氨基酚的线性响应。我们分析了 0.05、1、5、7.5、15 和 20 µg/mL 6 个浓度的校准标样，并将它们的峰面积对浓度绘制曲线（图 1）。回归系数 R² 为 0.9999，表明方法的线性良好。

出色的准确度和精度

为了论证方法的准确度，我们分析了浓度 0.5 µg/mL 和 15 µg/mL 的对乙酰氨基酚质控 (QC) 标样，并采用先前生成的校准曲线计算了其浓度。为了评估方法的精度，我们分三次准备了这两个 QC 标样（三批），每一批都重复进样六次。我们通过同一序列重复进样间的标准偏差来评估批内精度，并通过不同批间结果的变异来评估批间精度。准确度和精度研究的结果汇总于表 2 中。

QC 样品浓度 (µg/mL)	批号	计算浓度 (µg/mL)	准确度	批内 RSD (%) n = 6	批间 RSD (%) n = 3
0.5	1	0.51	101.08	0.23	0.58
	2	0.51	101.41	0.42
	3	0.50	100.24	0.19
15	1	15.06	100.41	0.15	0.62
	2	14.85	98.98	0.11
	3	14.93	99.52	0.07

表 2. 对乙酰氨基酚的分析结果表明，该方法具有优异的准确度和批内、批间精度

两个浓度和所有批次样品的准确度都在非常低的误差范围内，低于 ±2%。批内和批间的相对标准偏差 (RSD) 值均在 0.7% 以下，表明方法的精度良好。

市售药物片剂的精确定量分析

将两个不同品牌、标示量均为 500 mg/片的扑热息痛片溶解后，采用 Agilent Captiva 优级注射式过滤器过滤，并进行分析。我们之所以选择再生纤维素过滤膜，是因为它在前期研究 [2] 中展现了优异的样品回收率。

如表 3 所示，两个品牌样品的回收率分别为 97.8% 和 100.7%，两者均在 USP 规定的 90% - 110% 范围内。这些结果证明注射式过滤器具有优异的过滤回收率，分析方法可靠性高。每个品牌三个不同批次样品间的 RSD 分别为 0.31% 和 0.17%，表明系统可以实现精确的定量分析。

对乙酰氨基酚	每片的标示量 (mg)	计算量 (mg)	准确度 (%)	RSD (%)
品牌 <a> A	500	488.8	97.8	0.31
品牌 B	500	503.3	100.7	0.17

表 3. 混合系统为扑热息痛片的分析提供了可靠的准确度和精度

安捷伦备件与那些来自原始设备制造商的备件性能完全相同

总之，我们按照 USP 方法分析了对乙酰氨基酚，并且进行了特异性、线性范围、准确度、精度和回收率研究来验证分析方法。采用 Waters Alliance 系统进行 HPLC 分析，并配备了来自 Agilent CrossLab 性能维护包完善的泵和自动进样器部件。我们还在 Alliance 系统上使用了 Agilent CrossLab 氘灯，并获得了良好的结果，表明 Agilent CrossLab 备件的性能与原厂部件的完全一致。

如需了解更多详细信息，请参见安捷伦应用简报 5991-6017EN。如果下次您需要用于 Waters Alliance 系统的备件，请记得 Agilent CrossLab 备件可提供可靠的结果。

参考文献

1. U.S. Pharmacopeia for Acetaminophen Tablets. United States Pharmacopoeial Convention, Rockfield, MD, USA.
2. L. Zhao; W. Long. Syringe Filter Suitability for Sample Preparation in Drug Assays（注射式过滤器在药品分析的样品前处理中的适用性）; 安捷伦应用简报 5991-2409EN, 2013.

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