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采用安捷伦分流器套装最大限度提高制备型液相色谱的回收率

Pierre Penduff
安捷伦液相色谱应用化学家，生命科学事业部

在多肽合成中，反应后残余的非芳香族氨基酸由于只具有很少或根本不具有发色团，不能由常规的紫外检测器进行监测。因此，蒸发光散射检测 (ELSD) 或者质谱检测就成为了必要的检测手段。带分流器套装的 Agilent 1260 Infinity ELSD 能为监测和触发目标化合物收集提供最简便的方式，而且不存在同时收集到杂质的风险。

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表 1. 适用于不同流速安捷伦纯化系统的分流器和毛细管套装

安捷伦分流器套装在 ELSD 和馏分收集器之间对制备流量进行分流（在色谱柱和紫外检测器之后）。制备流量主体部分流向馏分收集器，分流部分流向 ELSD。通过系统背压产生限流实现分流。分离器套装设计用于流速为 1 到 300 mL/min 之间的制备型高效液相色谱 (HPLC) 应用。因此，不同的流速范围和系统需要不同的分流器套装（表 1）。

可通过基于 ELSD 或者紫外峰的馏分收集方法收集样品混合物。在本文中，我们重点介绍了若干例子来展示安捷伦 ELSD 系统配备分流器套装后的性能 — 主要着眼于重复性、回收率和纯度。

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图 1. 从通用接口盒获得的 6 次进样信号及其保留时间和峰面积精度

最大限度提高样品回收率

我们对类似药物的样品混合物进行纯化，其中包含不具有发色团的目标化合物。为了证明分流器的可靠性能，我们对保留时间和峰面积的标准偏差进行了计算。采用 1260 Infinity ELSD 的 Agilent 1260 Infinity 制备型纯化系统能提供具有高度重现性的纯化结果，保留时间和平均峰面积的平均 RSD 分别为 0.02% 和 2.74%（图 1）。

通过Agilent ZORBAX SB-C18 Prep HT 卡套柱 (21.2 x 100 mm, 5 µm) 上样 750 µL 样品混合物测得系统的典型回收率和纯度。本次纯化的回收率为 91%，纯度为 99%。

优化您的制备系统

我们已经了解了应用简单的分流器解决方案如何提高对小分子或未带有紫外发色团化合物的纯化检测。然而，为了确保最高的可靠性和馏分收集纯度，还需要对其他参数进行优化。例如，需要对检测器和馏分收集器之间的延迟时间进行测量。此延迟时间即化合物在检测器中被监测的时间和该化合物到达馏分收集器分流阀的时间之差。正确测定延迟时间是确保系统优化的关键一步。此流程通过 Agilent LabAdvisor 软件可在 1260 Infinity 馏分收集器上自动运行。

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图 2. 分别在 25%、50% 和 75% 的最大光强下获得 3 次进样（每次 250 µL）的 ELSD 信号叠加图

基于色谱峰的馏分收集调节同样可以在纯化化合物的峰形和进样混合物的上样方面进行优化。此步骤包括分析柱上的初步测试或者进行一次试运行以确定阈值、正斜率和负斜率。

最后，由于高浓度下 ELSD 的高灵敏度会导致检测器饱和。在 Agilent 1260 Infinity ELSD 上通过降低光强度可以降低此灵敏度。馏分收集器的上限阈值同样需要调节到检测器的饱和值以下，以防止在检测器饱和下发生斜率触发。对于 ELSD，如图 2 所示，上限阈值可使用 1000 mV。

有关安捷伦 ELSD 分流器的更多信息，请参阅安捷伦技术概览和安捷伦分流器套装安装手册。

制备样品的高载样量

无论是要将常规分析方法放大，还是在每个生产阶段中保持精确的分离，安捷伦种类繁多的制备和生产色谱柱以及散装填料都可为高载样量分析提供多种粒径和固定相。此外，我们的 ELSD 耗材和备件能为各种光谱范围的 ELSD 应用提供最高的质量和性能水平。

完善的液相色谱纯化解决方案

安捷伦为液相色谱纯化提供了广泛的解决方案产品组合，包括基于工作流程的新型 Agilent 1260 Infinity 自动化液质联用纯化系统，无需方法开发或大量的工作即可提供馏分纯化，从而满足可靠的化合物确认和高通量分析的要求。新型 Aginlent 1260 Infinity 自动化 LC/UV 纯化系统是一个真正意义上的自动化 LC/UV 系统，同样在无需方法开发或大量工作的条件下（只需最小的投资和培训），即可进行馏分纯化。如需了解更多，请花几分钟时间观看我们位于液相色谱检测器视频标签页中信息丰富的蒸发光检测视频。

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