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色谱工作者在高 pH 条件下开展工作时将不再损失分析性能

Jason Link
安捷伦小分子 HPLC 色谱柱产品经理

许多挑战使 HPLC 方法开发面临前所未有的困难。其中一个例子就是现在越来越多的公司在全球各地都有了实验室，这些公司必须能够在其各实验室网络之间进行方法转移，许多情况下还包括那些合同实验室。为了保持效率和准确性，一种耐用而稳定的方法变得至关重要。

跟踪流动相 pH 进行方法优化

耐用的方法需要同样稳定的方法开发过程。良好的开发过程的关键是要保持持久、稳定而可靠的方法。方法开发中常用的步骤包括选择分离模式、色谱柱化学性质和有机相流动相。一个常常被忽略的步骤是对流动相的 pH 进行调节，而这一步骤在方法开发中充当着非常重要的角色。离子化化合物（如酸和碱）的保留时间和选择性会随着 pH 的改变而发生明显变化。由于选择最佳 pH 对方法开发极为重要，因此在方法开发过程中将低、中和高 pH 条件下的分析作为标准程序变得越来越普遍。

然而，虽然使用低、中和高 pH 分析提高了目标分析物成功分离的可能性，但同时也面临着一些挑战。因为大多数 HPLC 色谱柱是由硅胶担体制成的，使用中等或高 pH 的方法时，可能会降低柱寿命，尤其是该 pH 条件下还伴有高温时。在这种较高的 pH 条件下，分析物的保留可能在一段时间后发生位移，从而导致意外结果的产生，因此需要频繁更换色谱柱。最终增加了方法的分析成本。

引起保留时间漂移的可能原因是在该 pH 的条件下，HPLC 柱被损坏。在这些高 pH 条件下，硅胶担体中的硅氧烷键发生了水解，导致硅胶溶解。从而造成保留时间漂移和色谱分离质量变差。

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图 1. 用 Agilent Poroshell 120 HPH 柱（溶剂 A 为缓冲液，溶剂 B 为乙腈）进行方法开发时在低、中和高 pH 条件下的分离

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图 2. 用 Agilent Poroshell HPH-C18 和非安捷伦高 pH 色谱柱，在极端 pH 10 的条件下，对含酸、碱和中性化合物混合物的 2000 次进样的分离

新的 Poroshell 技术延长了色谱柱在高 pH 条件下的寿命

现在新的柱技术可以应对硅胶溶解以及所造成的保留时间漂移问题。正如前面所提到的，大多数 HPLC 柱是由硅胶制成的，因而限制了高 pH 条件下对耐用色谱柱的选择。此外，越来越多的色谱工作者转而使用表面多孔技术进行快速液相色谱分析，除了硅胶基质的色谱柱他们别无选择。

安捷伦推出了 Poroshell HPH-C18 和 HPH-C8 技术，可应对高 pH 条件下的硅胶溶解问题。该色谱担体采用一种在硅胶表面进行有机改造的专利工艺，在高 pH 条件下仍能保持稳定。而且，Agilent Poroshell 120 系列产品都使用了这种技术，因此不管流动相的 pH 如何变化，您都可以继续使用 Poroshell 120 柱进行快速液相色谱方法开发。

图 1 显示了这种化学性质如何提高了您方法开发的灵活性。采用低、中和高 pH 的方法分离含有酸、碱和中性化合物的混合物。在较高 pH 条件下所有化合物都得到了最好分离，这将是未来方法最好的选择。但是，如果色谱柱有硅胶担体可能会出现问题。由于 Agilent Poroshell HPH-C18 具有经过有机改性的硅胶担体，因此可以在高 pH 条件下使用该色谱柱，从而可减少对色谱柱寿命的影响。图 2 显示了使用 Agilent HPH-C18 和非安捷伦高 pH 色谱柱，在高 pH 和温度的条件下，对酸碱和中性混合物进行 2000 次进样的效果 。

更高的 pH：通过固定相化学提高方法开发的灵活性

在高 pH 条件下提高的保留稳定性，为色谱工作者带来了使用广泛的 Agilent Poroshell 120 系列产品的优势。由于对反压的影响较小，因此缩短了分离时间，提高了分析通量。新的 Poroshell HPH 延长了高温和高 pH 条件下的柱寿命，最大限度减少了实验室的停机时间，并节省了时间和成本，成功解决了方法开发中长期存在的问题。

Agilent Poroshell 120 和所有现有的液相色谱一起使用时，还能提供与亚 2 µm 色谱柱相当的性能。Poroshell 120 色谱柱可耐压 600 bar，非常适用于快速 UHPLC 分析，能提升传统 5 µm 老方法的分析速度，将分析时间缩短 4 至 5 倍。有了与 ZORBAX 化学性质相似的 10 种固定相系列产品，方法开发和转移将更加灵活和轻松。安捷伦提供了许多实用 Poroshell 120 色谱柱的资料和实例，借此您可以按行业浏览应用报告。亲自了解硅胶表面改性的 Agilent Poroshell 120 系列色谱柱在极端条件下比其他色谱柱更耐用的原因。

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