高特异性 miRNA QRT-PCR 检测 — 详情与规格

安捷伦高特异性 miRNA QRT-PCR 检测试剂盒为总 RNA 中 microRNA (miRNA) 的多聚腺苷酸化以及由这些加尾 miRNA 合成的第一链 cDNA 提供了合格的试剂（图 1），另外还提供了一种新型 PCR 酶制剂和 QPCR 检测试剂，旨在为 miRNA QPCR 检测提供最高特异性。试剂盒包括两个模块，一是 miRNA 在 3’ 端的多聚腺苷化和将多聚腺苷化 miRNA 转化为 cDNA 的反转录（miRNA 第一链 cDNA 合成试剂盒），二是用 QPCR 对 cDNA 的检测（高特异性 miRNA QPCR 核心试剂盒）。

图 1：检测 miRNA 的 QRT-PCR 方法第 1 步：为总 RNA 中的 miRNA 加 poly A 尾端。第 2 步：用接头配引物进行逆转录（5’ 端具有独特序列的寡核苷酸 dT 与通用逆转录引物结合）。第 3 步：用 miRNA 特异性正向引物和通用反向引物进行 QPCR

高特异性 miRNA QRT-PCR 检测试剂盒具有极高的特异性和灵敏度。试剂盒可从各种样品的低至 15 ng 的总 RNA 中优先检出成熟的 miRNA。试剂盒可直接检测裂解细胞中或从组织、细胞培养物和 FFPE 组织提取的总 RNA 中的 miRNA。

我们的高特异性 miRNA QRT-PCR 检测试剂盒可区分仅有一个核苷酸差异的 miRNA，如检测所有人类 let-7 家族成员间不足 1% 的交叉反应（图 2）。为实现这一目标，我们优化了 QPCR 试剂，提高了特异性，并开发了专有的 miRNA 的引物设计方法。

图 2：高特异性 miRNA QRT-PCR 检测试剂盒的灵敏度可区分一个核苷酸。特异性相当于甚至优于其他市售试剂盒。高特异性 miRNA 检测试剂盒的特异性高于其他市售试剂盒。根据完全匹配和不匹配分析的 CT 差值计算相对检出率 (%)

我们的高特异性 miRNA QRT-PCR 检测试剂盒经过优化，可利用 EvaGreen^® 检测试剂检测并定量 15–250 ng 总 RNA 中的 miRNA，从而获得更高的灵敏度和特异性。EvaGreen 是一款用于定量 PCR (QPCR) 的出色 DNA 荧光染料。与 DNA 结合后，EvaGreen 的荧光强度是 SYBR^® Green I 几倍之多，前者对 PCR 过程几乎没有抑制作用（图 3）。与报道称不稳定的 SYBR Green 不同，EvaGreen 非常稳定。此外，EvaGreen 的吸收光谱和发射光谱与 SYBR Green I 相似，这意味着对 SYBR Green I 的光学设置同样也可以用于 EvaGreen。

图 3：EvaGreen^® 非常稳定。将 1.2 µmol/L 的 EvaGreen 染料或 SYBR^® Green I 染料溶液溶于 pH 9 的 Tris 缓冲液中，在 99 °C 孵育超过 3 个小时。图中显示了每种溶液的吸收光谱。添加 Rox 作为稳定的参比（由 Biotium Inc 提供）

仅限研究使用。不可用于诊断目的