이 섹션에는 XF 어세이를 설정하는 데 필요한 재료가 나열되어 있습니다.

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참고: 모든 XFp 어세이 키트 및 소모품은 XF HS Mini 분석기와 호환됩니다.

1.1 애질런트의 필수 재료

1.2 사용자가 제공하는 기타 필수 재료

1.1 애질런트의 필수 재료

1.2 사용자가 제공하는 기타 필수 재료

이 섹션에서는 세포 분주 밀도 선택에 대한 가이드, XF 조직 배양 플레이트에 부착 세포를 분주하는 기술 및 XF 카트리지 수화 기술을 포함하여 XF 어세이 전날의 준비 기술에 중점을 둡니다.

이 섹션에서는 세포 분주 밀도 선택에 대한 가이드, 조직 배양 플레이트에 부착 세포를 분주하는 기술 및 XFp 카트리지 수화 기술을 포함하여 XFp 어세이 전날의 준비 기술에 중점을 둡니다.

이 섹션에서는 세포 분주 밀도 선택에 대한 가이드, XFp miniplate, XF HS miniplate, 또는 XF HS PDL miniplate에 부착 세포를 분주하는 기술 및 8웰 센서 카트리지 수화 기술을 포함하여 XF 어세이 전날의 준비 기술에 중점을 둡니다.

참고: XF HS Mini 어세이 실행과 관련된 단계의 개요는 워크플로 다이어그램을 참조하세요.

도움말 콘텐츠를 표시하려면 워크플로 단계를 선택하세요.

2.1 세포 분주 밀도 선택

2.2 카트리지 수화

2.2 카트리지 수화

2.3 실험 설계

2.3 세포 분주

2.4 세포 분주

2.4 세포 분주

2.4.1 XFp miniplate

2.4.2 XF HS miniplate

2.5 XFp PDL 또는 XF HS PDL miniplate 준비(부유 세포만 해당)

2.1 세포 분주 밀도 선택

2.2 카트리지 수화

8웰 센서 카트리지 수화를 위한 기본 절차

참고: XFp 센서 카트리지는 XF HS Mini 분석기와 호환됩니다.

XFp HS Mini 어세이 플랫폼의 중요한 구성 요소는 센서 카트리지입니다. 센서 카트리지의 각 probe tip은 고체상 센서 물질에 설치되며, pH와 O₂ 농도의 시간에 따른 변화를 감지해 그 비율을 계산하게 됩니다. 센서가 정확하게 작동하려면 완전히 수화되어야 합니다.

XFp HS Mini 어세이 전날:

• 50mL 코니칼 튜브에 최소 20mL의 XF 캘리브레이션 용액을 배분합니다. non-CO₂ 37°C 인큐베이터에 밤새 둡니다.
• 15mL 코니칼 튜브에 최소 5mL의 XF 캘리브레이션 용액을 배분합니다. non-CO₂ 37°C 인큐베이터에 밤새 둡니다.
• 세포 외 흐름(flux) 어세이 키트를 열고 내용물을 제거합니다.
• 녹색 상자에서 카트리지 3팩을 가져옵니다. 사용할 튜브에서 호일 씰을 제거합니다.
• 센서 카트리지를 뒤집어 유틸리티 플레이트 옆에 놓습니다.
• 유틸리티 플레이트와 센서 카트리지를 분리하고, 센서 카트리지를 뒤집어 유틸리티 플레이트 옆에 놓습니다.
• 유틸리티 플레이트의 각 웰에 200μL의 멸균 조직 배양 등급 물을 채웁니다.
• 챔버당 400μL로 웰 외부 주변의 moat를 채웁니다.
• 센서 카트리지를 유틸리티 플레이트 위로 내리고 센서를 물에 담급니다.
• 물의 높이가 센서를 잠기게 할 만큼 충분히 높은지 확인합니다.
• non-CO₂ 37°C의 인큐베이터에 밤새 둡니다. 수분 증발을 방지하기 위해 인큐베이터가 적합하게 가습되었는지 확인합니다.
• 센서 카트리지 수화 프로토콜은 학습 센터의 섹션 3.1에 계속 이어집니다.

• Agilent Seahorse Flux 어세이 키트를 열고 내용물을 제거합니다.
• 센서 카트리지를 뒤집어 유틸리티 플레이트 옆에 놓습니다.
• 유틸리티 플레이트의 각 웰에 1mL를 XF 캘리브레이션 용액을 채웁니다.
• 유틸리티 플레이트 위에 하이드로부스터를 올려 놓습니다.
• 센서 카트리지를 하이드로부스터 플레이트의 입구를 통해 유틸리티 플레이트로 내려 XF 캘리브레이션 용액에 센서를 담급니다.
• 센서 카트리지를 유틸리티 플레이트 위로 내리고 센서를 물에 담급니다.
• XF 캘리브레이션 용액의 높이가 센서를 잠기게 할 만큼 충분히 높은지 확인합니다.
• non-CO₂ 37°C 인큐베이터에 밤새 둡니다. XF 캘리브레이션 용액의 증발을 방지하려면 인큐베이터를 가습해야 합니다.
• 중요 참고 사항: 센서 카트리지를 Agilent Seahorse 분석기에 배치하기 전에 하이드로부스터를 제거해야 합니다. 그렇지 않으면 센서 카트리지와 분석기가 모두 손상될 수 있습니다. 자세한 가이드는 섹션 3을 참조하세요.

2.4 세포 분주

2.3 세포 분주

부착 세포 분주를 위한 기본 절차(일반적으로 XFp HS Mini 어세이 전날 수행)

테스트할 각 밀도에 대해 부착 세포에 대해 가이드에 따라 분주합니다. 부유 세포 분주에 대한 가이드를 확인하세요.

Agilent Seahorse XFp HS Mini 어세이는 센서 카트리지와 함께 Agilent Seahorse 96웰 24웰 8웰 XFp 세포 배양 마이크로플레이트 세포 배양 Miniplatep, XF HS, XFp PDL, 또는 XF HS PDL miniplate에서 수행합니다. XFe96 센서 카트리지. 8웰 센서 카트리지. 이 절차에서는 Agilent Seahorse 분석기와 함께 사용하기 위한 부착 세포 유형 분주에 대한 권장 사항을 설명합니다. 부유 세포 분주에 대한 가이드를 확인하세요.

초기 어세이에는 기기와 함께 XF96 세포 배양 플레이트, XFe96 카트리지 및 Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay 키트를 사용하여 4가지 서로 다른 세포 밀도에 대한 분석법이 권장됩니다.

초기 어세이에는 기기와 함께 2개의 세포 배양 플레이트, 2개의 카트리지 및 XF 세포 에너지 표현형 테스트 키트를 사용하여 4개의 서로 다른 세포 밀도와 4개의 서로 다른 FCCP 농도를 테스트하는 분석법이 권장됩니다.

초기 어세이에는 기기와 함께 XF24 세포 배양 마이크로플레이트, XFe24 센서 카트리지 및 Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay 키트를 사용하여 4가지 서로 다른 세포 밀도를 테스트하는 분석법이 권장됩니다.

초기 어세이에는 XFp 기기XF HS Mini 분석기와 함께 XFp 세포 배양 Miniplate, XFp 8웰 센서 카트리지 및 Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay 키트를 사용하여 2-4가지 서로 다른 세포 밀도를 테스트하는 분석법이 권장됩니다.

이는 4가지 세포 밀도를 분주하기 위해 제안된 XF96 어세이 플레이트 맵입니다.

2.4.1 XFp miniplate

플레이트 유형	최종 부착 세포 분주 부피	최종 분주 밀도(예시)	mL로 환산
XFp miniplate/ XFp PDL miniplate	80μL	1.0×104 세포/80μL	1.25×105 세포/mL

부착 세포 분주를 위한 기본 절차(일반적으로 XF 어세이 전날 수행)

• Agilent Seahorse XF24 세포 배양 마이크로플레이트를 분주할 때 2단계 분주 과정을 권장합니다. 2단계 과정을 통해 일관되고 균일한 세포 단층이 생성됩니다.
• 세포를 수집하고 원하는 최종 농도로 재부유하여 80μL의 성장 배지에 분주합니다. 최적의 세포 분주 수는 매우 다양하지만 일반적으로 웰당 5 × 10³-4 × 10⁴ 세포 사이이며 경험에 따라 결정해야 합니다. (예를 들어, 웰당 1 x 10⁴세포의 경우 80μL당 세포 1 x 10⁴= mL당 1.25 x 10⁵세포를 재부유합니다.)
• 세포를 수확하고 원하는 최종 농도로 재부유하여 100μL의 성장 배지에 분주합니다. 최적의 세포 분주 수는 매우 다양하지만 일반적으로 웰당 1×10⁴-8×10⁴ 세포 사이이며 경험에 따라 결정해야 합니다. (예를 들어, 웰당 2 x 10⁴세포의 경우 100μL당 세포 2 x 10⁴= mL당 2.0 x 10⁵세포를 재부유합니다.)
• 웰당 80μL의 세포 부유액을 분주합니다. 백그라운드 웰에는 세포를 분주하지 않습니다(A1, A12, H1, H12). 백그라운드 보정 웰에는 배지만(세포 없음) 넣어야 합니다.
• 웰 B-D에서 웰당 80μL의 세포 부유액을 분주합니다. 백그라운드 웰에는 세포를 분주하지 않습니다(A 및 H). 백그라운드 보정 웰에는 배지만(세포 없음) 넣어야 합니다.
• 웰당 80μL의 세포 부유액을 분주합니다. 백그라운드 웰 A와 H에는 세포를 첨가하지 않습니다. 웰 바닥에 기포가 관찰되면 플레이트를 200 x g에서 1-2분 동안 원심분리하여 기포를 제거할 수 있습니다.
• 웰당 100μL의 세포 부유액을 분주합니다. 백그라운드 웰에는 세포를 분주하지 않습니다(A1, B4, C3, D6). 백그라운드 보정 웰에는 배지만(세포 없음) 넣어야 합니다.
• 중요: 플레이트를 조직 배양 후드 내에서 실온 조건 하에 1시간 동안 안정되도록 둡니다.¹ 이는 균일한 세포 분포를 촉진하고 일부 세포 유형에 대한 엣지 효과를 줄일 수 있습니다. 현미경을 사용하여 부착성을 모니터링합니다.
• 세포가 부착될 수 있도록 표준 세포 배양 인큐베이터에 플레이트를 놓습니다. 일반적으로 접착력이 강한 부착 세포의 경우 약 1시간이 걸리지만 접착력이 약한 부착 세포 유형의 경우 5-6시간이 걸릴 수 있습니다. 현미경을 사용하여 부착성을 모니터링합니다.
• 1시간 안정 단계 후 세포의 부착 여부를 확인합니다.
• 세포가 잘 부착된 경우 각 웰에 150μL의 세포 성장 배지를 추가로 분주한 다음(총 250μL) 플레이트를 표준 세포 배양 인큐베이터로 옮깁니다.
• 세포가 플레이트에 잘 부착되지 않는 경우, 세포가 단단히 부착될 때까지 1-5시간 더 기다린 다음(생물안전 캐비닛에서) 각 웰에 150µL의 성장 배지를 추가로 첨가하고(총 250µL) 플레이트를 표준 세포 배양 인큐베이터로 옮깁니다.
• 세포가 부착된 후 각 웰에 150μl의 성장 배지를 첨가하여 웰의 총 배지 부피를 250μl로 만듭니다. 웰에 배지를 첨가할 때 새로 부착된 세포를 방해하지 않도록 측면에 천천히 첨가합니다.
• 세포가 세포 배양 인큐베이터에서 밤새 성장하도록 합니다. 현미경을 사용하여 세포의 성장과 건강을 모니터링합니다.

1 Lundholt BK, Scudder KM, Pagliaro L. A simple technique for reducing edge effect in cell-based assays. J Biomol Screen. 2003 Oct;8(5):566-7

이 섹션에서는 어세이 배지 준비를 포함하여 XFp 어세이 당일에 수행되는 기술에 중점을 둡니다. 비부착 세포 분주 및 주입용 용액으로 XFp 센서 카트리지 포트에 로딩.

도움말 콘텐츠를 표시하려면 워크플로 단계를 선택하세요.

3.1 카트리지 및 어세이 배지 준비

3.2 세포 세척

3.3 용액 조립

3.4 주입 용액 로드

3.2 부유 세포 분주

3.2.1 XFp PDL miniplate

3.2.2 XF HS PDL miniplate

3.3 부착 세포 세척

3.3.1 XFp PDL miniplate

3.3.2 XF HS PDL miniplate

3.4 용액 조립

3.5 주입 용액 로드

3.1 카트리지 및 어세이 배지 준비

XF 어세이 배지 준비

Seahorse 어세이는 대사 활동의 정확하고 일관된 기능적 측정을 위해 특정 배지가 필요합니다.

애질런트는 즉시 사용 가능한 저완충 배지를 제공하며, pH 7.4로 사전 조정되어 호환 가능한 보조제를 사용하면 어세이 준비를 간소화하고 일관된 어세이 조건을 제공할 수 있습니다. 이 즉시 사용 가능한 XF 어세이 배지 시스템에 대한 주문 정보를 보거나 배지 선택 가이드를 다운로드하세요.

또는 연구자는 사용 중인 어세이 키트와 일치하는 구성으로 배지를 제조할 수 있습니다. 모든 조성물은 특정 어세이 설계에 따라 결정된 대로 다른 기질/완충액을 첨가하여 Agilent Seahorse XF 배지 중 하나를 사용하여 준비할 수 있으며, 아래 예는 Seahorse XF Real-Time ATP 생성률 어세이 세포 에너지 표현형 테스트입니다.

Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay 키트와 함께 사용할 다음 XF 어세이 배지를 준비합니다.

연구자는 사용 중인 어세이 키트와 일치하는 구성으로 XF 어세이 배지를 제조해야 합니다. 모든 조성물은 특정 어세이 설계에 따라 결정된 대로 다른 기질/완충액을 첨가하여 Agilent Seahorse XF 배지 중 하나를 사용하여 준비할 수 있으며, 아래 예는 Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay 키트 세포 에너지 표현형 테스트입니다.

세포 에너지 표현형 테스트에 사용할 다음 XF 어세이 배지를 준비합니다.

애질런트 시약/애질런트 부품 번호	최종 농도	부피
Seahorse XF DMEM 배지, pH 7.4a, b/103575-100 또는 Seahorse XF RPMI 배지, pH 7.4a, b/103576-100	XF Base 배지(w/out Phenol Red)a, b/103335-100 또는 XF RPMI (w/out Phenol Red)a, b/103336-100	Seahorse XF DMEM 배지a,b/103575-100 또는 Seahorse XF RPMI 배지a,b/103576-100	-	97.0mL	9.70mL
Seahorse XF Glucose(1.0M 용액)/103577-100	10mM	10μL	10mM	1.0mL	100μL
Seahorse XF Pyruvate(100mM 용액)/103578-100	1mM	1.0mL	100μL
Seahorse XF L-Glutamine(200mM 용액)/103579-100	2mM	1.0mL	100μL
a XF DMEM 및 RPMI 배지, pH 7.4는 사전 조정된 pH 값을 가지며 XF 보조제를 첨가할 때 pH를 조정할 필요가 없습니다. 준비와 관련된 사항은 아래 분석법을 참조하세요. Seahorse XF DMEM 배지 pH 7.4 및 RPMI 배지, pH 7.4는 XF24 분석기와 호환되지 않습니다. b 다른 유형의 XF 배지를 사용한 준비 다른 유형의 XF 배지를 사용한 준비 다른 유형의 XF 배지를 사용한 준비 다른 유형의 XF 배지를 사용한 준비 다른 유형의 XF 배지를 사용한 준비.

XF DMEM 배지 pH 7.4 또는 XF RPMI 배지 pH 7.4를 준비하기 위한 기본 절차

XF Base 배지(w/o Phenol Red) 또는 XF RPMI(w/o Phenol Red) 준비를 위한 기본 절차

필요한 장비:

• 37°C 수조
• 검량된 pH 측정기
• 교반 플레이트
• 멸균 필터병(0.22μm 필터) 및 캡
• 1.0N NaOH 용액

Agilent Seahorse XF DMEM 배지 pH 7.4 및 XF RPMI 배지 pH 7.4는 다음과 같은 이점을 제공하도록 설계되었습니다.

• 편의성: Agilent Seahorse XF 보조제와 함께 권장되는 대로 사용하는 경우 최종 pH 조정이 필요하지 않습니다.
• 일관성: 낮은 농도의 HEPES 완충액(5mM, DMEM, 1mM, RPMI)은 보다 일관된 XF 데이터를 제공합니다.
• 정량: 고정된 완충액 용량을 갖춘 어세이 배지를 사용하면 양성자 유출율(PER)을 정량적으로 측정할 수 있습니다.

1. 적합한 양의 XF DMEM 배지 pH7.4 또는 XF RPMI 배지 pH 7.4를 멸균병에 넣어 37°C로 따뜻하게 합니다. 일반적으로 플레이트 1개에는 100mL이면 충분합니다.
2. 적합한 양의 XF Base 배지(w/o Phenol Red) 또는 XF RPMI(w/o Phenol Red)를 멸균병에 넣어 37°C로 따뜻하게 합니다. 일반적으로 XF24 플레이트 1개에는 100mL이면 충분합니다.
3. 위 표에 표시된 적합한 양의 Seahorse XF 보조제(XF Glucose 용액, XF Pyruvate 용액 및 XF L-Glutamine 용액)를 첨가합니다.
4. 1N NaOH를 사용하여 배지의 pH 값을 7.4로 조정합니다. 참고: NaOH를 첨가하면 pH 값이 빠르게 변합니다. 소량을 사용하고 천천히 첨가하여 pH 값을 조정합니다.
5. 0.2μm 필터로 어세이 배지를 멸균합니다.
6. 사용할 준비가 될 때까지 최종 XF 어세이 배지를 37°C에서 배양합니다.

3.2 부유 세포 분주

XF HS PDL miniplate 및 XFp PDL miniplate에 부유 세포를 분주하는 기본 절차

참고: XF HS PDL miniplate의 부유 세포 분주에 대한 추가 정보를 보려면 아래 관련 지원 자료에 있는 지침을 따르세요.

부유 세포의 최적 세포 밀도는 세포 크기에 따라 다릅니다. 일반적으로 최적의 세포 분주 밀도는 웰에 세포가 70-90%의 합류 지점에서 단층으로 분포하는 것입니다. 현미경으로 세포 분포를 검사하여 (1) 모든 세포가 코팅 표면에 고르게 접촉할 수 있도록 세포 사이에 적합한 공간이 있는지, (2) 세포 클러스터가 최소화되었는지 확인할 것을 강력히 권장합니다. 최적의 밀도 이상으로 과도한 수의 세포를 분주하거나 세포가 서로 클러스팅되면 세포 접착력이 떨어지고 속도 측정이 부정확해질 수 있습니다.

• 세포 배양 마이크로플레이트는 성장 용기에서 코니칼 튜브로 적합한 양의 세포 부유액을 옮깁니다.
• 하나의 XFp miniplate, XF HS miniplate 또는 XF HS PDL miniplate의 경우 성장 용기에서 코니칼 튜브로 적합한 양의 세포 부유액을 옮깁니다.
• 필요한 총 세포 수를 계산하려면 웰당 원하는 세포 수에 Seahorse XFe96의 웰 100개를 곱합니다. (예를 들어 웰당 150,000개 세포 × 100개 웰 = 1.5 × 10⁷ 세포).
• 필요한 총 세포 수를 계산하려면 웰당 원하는 세포 수에 Seahorse의 웰 10개를 곱합니다. (예를 들어 웰당 150,000개 세포 × 10개 웰 = 1.5 × 10⁶ 세포).
• 실온에서 200 x g으로 5분간 세포를 원심분리합니다.
• 세포가 원심분리되는 동안 피펫 50μL 어세이 배지를 예열된 PDL 코팅 Seahorse XF96 세포 배양 마이크로플레이트 또는 Cell-Tak 코팅 Seahorse XF96 세포 배양 플레이트의 백그라운드/대조 웰에 피펫팅합니다.
• 세포가 원심분리되는 동안 피펫 50μL 어세이 배지를 예열된 PDL 코팅 Seahorse XFp 세포 배양 마이크로플레이트 또는 Cell-Tak 코팅 Seahorse XFp 세포 배양 플레이트의 백그라운드/보정 웰(A 또는 H)에 피펫팅합니다.
• 원심분리된 코니칼 튜브에서 상등액을 제거합니다.
• 50μL의 어세이 배지에 웰당 원하는 세포 농도로 따뜻해진 어세이 배지에 세포를 재부유합니다.(예를 들어 웰당 1.5×10⁵ 세포가 필요한 경우, 1.5×10⁵ 세포/50μL 또는 3.0×10⁶ 세포/mL가 되는 부피로 세포를 재부유합니다.)
• 원심분리기 설정을 브레이크 제로로 변경합니다.
• 세포 부유액을 멸균 조직 배양 저장소로 옮기거나 코니칼 튜브에서 피펫팅합니다.
• 백그라운드/대조 웰을 제외하고 각 웰의 측면을 따라 세포 부유액의 50μL을 피펫합니다. 멀티채널 피펫을 사용하는 것을 권장합니다.
• miniplate를 XFp 캐리어 트레이에 놓고 브레이크 없이 1분 동안 300 x g로 원심분리합니다. 캐리어는 최대 3개의 miniplate를 수용하고 표준 원심분리 마이크로플레이트 어댑터에 적합하도록 설계되었습니다. 원심분리기 로터의 균형이 적합하게 잡혀 있는지 확인합니다.
• 원심분리 후 세포가 웰 바닥에 부착되었는지 시작적으로 확인합니다.
• 200 × g(브레이크 제로)에서 1분간 세포를 원심분리합니다. 원심분리기의 균형이 적합하게 잡혀 있는지 확인합니다.
• 바닥에 있는 세포를 손상시키지 않도록 주의하면서 각 웰에 130μL 어세이 배지를 원하는 초기 어세이 부피(180μL 시작 어세이 부피의 경우)까지 부드럽게 첨가합니다.
• 세포 배양 웰 주변의 moat에 멸균수 또는 PBS를 챔버당 100μL 첨가합니다. 50μL로 설정된 8채널 피펫터(사용 가능한 경우)를 사용하여 챔버당 2개의 팁을 사용하여 moat의 양쪽을 채웁니다. 멀티채널 피펫을 사용할 수 없는 경우 moat의 각 챔버에 100μL의 멸균수 또는 PBS를 개별적으로 채웁니다(총 800μL).
• 플레이트를 CO₂가 보충되지 않은 37°C 인큐베이터로 옮겨 25-30분 동안 세포가 완전히 부착되었는지 확인합니다. 대부분의 세포가 배지 표면에 안정적으로 부착되었는지 시작적으로 확인합니다.
• 천천히 그리고 부드럽게 각 웰의 측면을 따라 따뜻한 어세이 배지 130μL를 첨가합니다. 세포를 손상시키지 않도록 주의하세요.
• 세포가 분리되지 않았는지 확인하기 위해 현미경으로 세포를 관찰합니다.
• 세포 플레이트를 인큐베이터에 15-25분 동안 다시 넣습니다.
• 15-25분 후에 세포 플레이트가 어세이 준비가 완료됩니다. 최상의 결과를 얻으려면 원심분리 후 총 시간이 1시간을 넘지 않아야 합니다.

• Seahorse XF24 세포 배양 마이크로플레이트 1개의 경우 적합한 양의 세포 부유액을 성장 용기에서 코니칼 튜브로 옮깁니다.
• 필요한 총 세포 수를 계산하려면 웰당 원하는 세포 수에 Seahorse XF24의 웰 25개를 곱합니다. (예를 들어 웰당 150,000개 세포 × 25개 웰 = 3.75 × 10⁶ 세포).
• 실온에서 200 x g으로 5분간 세포를 원심분리합니다.
• 세포가 원심분리되는 동안 피펫 100μL 어세이 배지를 실온 Cell-Tak 코팅 Seahorse XF24 세포 배양 플레이트의 백그라운드/대조 웰에 피펫팅합니다.
• 원심분리된 코니칼 튜브에서 상등액을 제거합니다.
• 100μL의 어세이 배지에 웰당 원하는 세포 농도로 따뜻해진 어세이 배지에 세포를 재부유합니다.(예를 들어 웰당 1.5×10⁵ 세포가 필요한 경우, 1.5×10⁵ 세포/100μL 또는 1.5×10⁶ 세포/mL가 되는 부피로 세포를 재부유합니다.)
• 원심분리기 설정을 브레이크 제로로 변경합니다.
• 세포 부유액을 멸균 조직 배양 저장소로 옮기거나 코니칼 튜브에서 피펫팅합니다.
• 백그라운드/대조 웰을 제외하고 각 웰의 측면을 따라 세포 부유액의 100μL을 피펫팅합니다. 애질런트는 멀티채널 피펫 사용을 권장합니다.
• 200 × g(브레이크 제로)에서 1분간 세포를 원심분리합니다. 원심분리기의 균형이 적합하게 잡혀 있는지 확인합니다. XFp 분석기 사용자의 경우, 애질런트는 Agilent Seahorse XFp 캐리어 트레이를 사용하여 Seahorse XFp 세포 배양 Miniplate를 원심분리할 것을 권장합니다. 자세한 내용은 기본 절차 "XFp 세포 배양 miniplate에 부유 세포 분주"를 참조하세요.
• 플레이트를 CO₂가 보충되지 않은 37°C 인큐베이터로 옮겨 25-30분 동안 세포가 완전히 부착되었는지 확인합니다. 대부분의 세포가 배지 표면에 안정적으로 부착되었는지 시작적으로 확인합니다.
• 천천히 그리고 부드럽게 각 웰의 측면을 따라 따뜻한 어세이 배지 400μL를 첨가합니다. 세포를 손상시키지 않도록 주의하세요.
• 세포가 분리되지 않았는지 확인하기 위해 현미경으로 세포를 관찰합니다.
• 세포 플레이트를 인큐베이터에 15-25분 동안 다시 넣습니다.
• 15-25분 후에 세포 플레이트가 어세이 준비가 완료됩니다. 최상의 결과를 얻으려면 원심분리 후 총 시간이 1시간을 넘지 않아야 합니다.

XFp PDL 또는 XF HS PDL miniplate에 부유 세포을 분주하는 데 필요한 단계 개요.

3.4 주입 용액 로드

3.5 주입 용액 로드

• A/D 로딩 가이드를 어세이 카트리지 위에 평평하게 놓습니다. 문자 'A'가 왼쪽 상단 모서리에 오도록 로딩 가이드의 방향을 맞춥니다. 로딩 중에 피펫 팁이 로딩 가이드에서 빠지지 않도록 손가락 끝으로 로딩 가이드의 바깥쪽 엣지를 잡고 고정합니다.
• 10-100μL 멀티채널 피펫을 사용하여 팁이 피펫에 단단히 고정되었는지 확인합니다. 피펫 팁(주입용 화합물로 채워져 있음)을 로딩 가이드의 원하는 컬럼에 놓고 팁의 방향을 아주 약간 기울입니다. 팁을 구멍에 저항 없이 최대한 삽입하고 화합물을 분주합니다. 팁을 구멍에 완전히 밀어 넣지 않습니다.
• 팁을 45° 각도로 잡습니다. 주입 포트의 반대쪽 벽에 대한 팁의 비스듬한 면을 사용하여 주입 포트에 팁을 중간에 놓습니다.
• 포트를 통해 화합물 누수가 발생할 수 있으므로 팁을 주입 포트 바닥에 완전히 삽입하지 않습니다.
• 아래 표시된 플레이트/그룹 레이아웃에 따라 적합한 주입 용액 20μL를 포트에 부드럽게 분주합니다. 절차 전반에 걸쳐 로딩 가이드를 조심스럽게 안정화하기 위해 포트에서 팁을 빼냅니다. 기포가 생기지 않도록 주의합니다. 기포의 생성을 완화하기 위해 카트리지의 어떤 부분도 두드리지 않습니다. 이로 인해 주입 포트에서 용액이 누수될 수 있습니다.
• 수행 중인 어세이에 따라 아래 표시된 플레이트/그룹 레이아웃에 따라 적합한 주입 용액 55μL를 포트에 부드럽게 분주합니다. 포트에서 팁을 조심스럽게 빼냅니다. 기포가 생기지 않도록 주의하되, 기포의 생성을 완화하기 위해 카트리지의 어떤 부분도 두드리지 않습니다. 이로 인해 주입 포트에서 용액이 누수될 수 있습니다.
• 아래 표시된 플레이트/그룹 레이아웃에 따라 적합한 주입 용액 20μL를 포트에 부드럽게 분주합니다. 절차 전반에 걸쳐 카트리지를 조심스럽게 안정화하기 위해 포트에서 팁을 빼냅니다. 기포가 생기지 않도록 주의합니다. 기포의 생성을를 완화하기 위해 카트리지의 어떤 부분도 두드리지 않습니다. 이로 인해 주입 포트에서 용액이 누수될 수 있습니다.
• A/D 포트 로딩 가이드를 제거하고 왼쪽 상단 모서리에 'B'가 표시된 B/C 포트 로딩 가이드로 교체합니다. 주입 용액 22μl를 사용하여 위 단계를 반복하여 포트 B를 로드합니다.
• 주입 용액 62μl를 사용하여 위 단계를 반복하여 포트 B를 로드합니다.
• 주입 용액 22μl를 사용하여 위 단계를 반복하여 포트 B를 로드합니다.
• 균일한 로딩을 위해 주입 포트를 시작적으로 검사합니다. 액체는 포트에 있어야 하며, 카트리지 위에 잔여 방울이 없는지 확인합니다.

세포 밀도 적정 어세이를 위한 주입 포트 로딩

XF Real-Time ATP Rate Assay 키트의 주입 포트 및 부피 - 세포 특성 규명
포트 및 화합물	부피	10X[포트]	[최종 웰]
포트 A Oligomycin	20µL	55µL	15µm	1.5µm
포트 B Rotenone + Antimycin A	22µL	62µL	5µm	0.5µm

웰의 최종 농도(μM)	FCCP 그룹	웰	포트/부피(μL)
Oligo / FCCP 1.0 / 1.0	1.0μM	A1-D6(전체)	A/55

FCCP 농도 적정 어세이를 위한 주입 포트 로딩

다른 유형의 XF 어세이를 수행하는 경우 해당 XF 키트 사용자 가이드와 두 개 이상의 주입 솔루션에 대한 적합한 로딩 분석법에 대한 아래 지침을 참조하세요.

• 화합물을 포트에 부드럽게 분주합니다. 포트에서 팁을 조심스럽게 빼내면서 분석을 수행하는 동안 로딩 가이드를 안정화합니다.
• 기포가 생기지 않도록 주의하되, 기포의 생성을 완화하기 위해 카트리지의 어떤 부분도 두드리지 않습니다. 이로 인해 주입 포트에서 화합물 누수가 발생할 수 있습니다.
• B/C 로딩 가이드로 전환합니다. 왼쪽 상단 모서리에 있는 문자 'B'를 기준으로 방향을 맞춥니다. 적합한 로딩 가이드를 사용하여 'B', 'C' 및 'D' 주입 포트에 대해 3-5단계에 설명된 로딩 절차를 반복합니다. 로딩 가이드를 제거하여 폐기합니다.
• 'B', 'C' 및 'D' 주입 포트에 대해 위 단계에 설명된 로딩 절차를 반복합니다.
• 균일한 로딩을 위해 주입 포트를 시작적으로 검사합니다. 액체는 포트에 있어야 하며, 카트리지 위에 잔여 방울이 없는지 확인합니다.

주입에 대한 일반 정보 및 가이드라인

• 권장되는 주입 부피는 20-30μL입니다.
• 권장되는 주입 부피는 50-100μL입니다.
• 180μL 어세이 배지의 마이크로플레이트 웰 용량으로 시작하여 주입 시 10X 희석을 위한 권장 주입 용액 용량.
  • 포트 A: 20μL
  • 포트 B: 22μL
  • 포트 C: 25μL
  • 포트 D: 28μL
• 500μL 어세이 배지의 마이크로플레이트 웰 용량으로 시작하여 주입 시 10X 희석을 위한 권장 주입 용액 용량.
  • 포트 A: 55μL
  • 포트 B: 62μL
  • 포트 C: 69μL
  • 포트 D: 75μL
• 사용되는 포트의 구성, 순서 및 수는 어세이 설계에 따라 달라집니다.
• 포트 오리피스를 통해 주입 용액이 누수될 수 있으므로 자동 피펫은 카트리지 로딩에 권장되지 않습니다.

이 섹션에서는 분석기에서 XF Real-Time ATP 생성률 어세이를 사용하여 초기 세포 특성 규명을 수행하는 데 중점을 둡니다.

이 섹션에서는 분석기의 세포 에너지 표현형 테스트를 사용하여 초기 세포 특성 규명을 수행하는 데 중점을 둡니다.

이 섹션에서는 XF HS Mini 분석기에서 XF Real-Time ATP 생성률 어세이를 사용하여 초기 세포 특성 규명을 수행하는 데 중점을 둡니다. 어세이 수행에 대한 자세한 내용은 XF HS Mini 사용자 가이드를 참조하세요.

중요 – XF 어세이를 시작하기 전

• 균일한 로딩을 위해 주입 포트를 시작적으로 검사합니다. 액체는 포트에 있어야 하며, 센서 카트리지 위에 잔여 방울이 없는지 확인합니다.
• 현미경으로 세포를 관찰하여 다음을 수행합니다.
  • 세포 건강, 형태, 분주 균일성 및 순도(오염 없음)를 확인합니다.
  • 부착 세포의 경우, 세포가 일관된 단일 층으로 부착되어 있고 세척 단계에서 씻겨 나가지 않았는지 확인합니다.
  • 부유 세포의 경우 원심분리, 세척 및 배양 후 세포가 안정적으로 부착되었는지 확인합니다.
  • 백그라운드 웰에 세포가 포함되어 있지 않은지 확인합니다.

어세이 중 측정값을 추가/제거하는 방법, 37°C 이외의 온도에서 XFe 어세이를 위한 환경 조건 등을 포함하여 XFe 분석기 어세이 작업에 대한 자세한 내용은 Wave 사용자 가이드의 2장을 참조하세요.

XF 어세이 결과 분석 섹션에서는 Agilent Seahorse Analytics의 기초와 Seahorse Analytics을 사용하여 XF Real-Time ATP 생성률 어세이 결과 파일을 분석하는 방법에 대해 알아봅니다. Wave Desktop 및 Report Generator에 대한 도움말 콘텐츠를 찾고 계신다면 여기를 클릭하세요.

Seahorse Analytics는 바탕 화면과 같은 상호 작용과 배우기 쉬운 인터페이스를 제공하는 웹 기반 소프트웨어 응용으로, 전 세계 어디서나 모든 컴퓨터에서 Agilent Seahorse XFe, XFp 및 XF HS Mini 분석기의 결과 데이터를 분석할 수 있습니다. 인터넷에 접속할 수만 있다면 Seahorse Analytics로 Seahorse 데이터를 분석할 수 있습니다.

참고: XF96 사용자의 경우 먼저 Wave Desktop 소프트웨어를 사용하여 .xfd 결과 파일을 어세이 결과 파일 형식으로 변환해야 합니다. .xfd 결과 파일은 Seahorse Analytics에서 분석할 수 없습니다.

자세히 알아보려면 아래에서 주제를 선택하세요.

5.1 소개

5.2 분석 보기

5.3 데이터 유형

5.4 데이터 표시 옵션

5.5 데이터 내보내기 및 공유

5.1 소개

Agilent Seahorse Analytics는 Seahorse 분석기를 위한 데이터 분석 소프트웨어로, 결과를 쉽게 가져와서 분석하고 보고하며 팀 또는 공동 작업자와 결과를 공유할 수 있습니다.

Agilent Seahorse Analytics에 대한 기초:

사양	세부사항
사용 목적	데이터 분석
Seahorse 데이터 파일 호환성	XFe96 어세이 결과 파일
	XFe24 어세이 결과 파일
	XFp 어세이 결과 파일
	XF HS Mini 어세이 결과 파일
인터넷 브라우저 호환성	Google Chrome
	Safari
	Mozilla Firefox
	Microsoft Edge Internet Explorer 사용을 권장하지 않습니다.
내보내기 옵션	Microsoft Excel (.xlsx)
	Graphpad Prism (.pzfx)
	이미지 파일(.JPG 및 .PNG)

Seahorse Analytics 사용자 인터페이스에 익숙해지기

홈 보기:

Seahorse Analytics 계정을 등록하거나 로그인하면 Home(홈) 보기(아래 그림)이 나타납니다 Home(홈) 보기로 돌아가려면 진한 파란색 탐색 리본의 왼쪽 상단 모서리에 있는 Home(홈) 버튼을 클릭합니다.

1. Home(홈) 보기의 데이터 파일 목록에는 파일 공유에서 가져오거나 편집 및/또는 수신한 가장 최근의 파일 5개가 표시됩니다.
2. 파일 목록 아래에는 하나 이상의 Seahorse XF 분석기를 프로필에 할당할 수 있는 내 분석기가 표시됩니다.
3. Home(홈) 보기에서 데이터 파일을 가져오려면 파일 목록 위의 오른쪽 상단에 있는 작은 File Upload(파일 업로드) 버튼을 클릭합니다.

파일 보기:

응용 상단의 진한 파란색 리본 왼쪽 상단에 있는 Files(파일) 버튼을 클릭하면 Seahorse Analytics 계정으로 가져온 모든 데이터 파일이 표시됩니다.

1. Files(파일) 보기의 왼쪽에 계정에 대해 만든 사용자 지정 폴더가 표시됩니다.
2. 파일 목록과 함께 제공되는 파일 메타 데이터(예: 마지막 수정 날짜, 기기 유형 등)는 Files(파일) 보기의 가운데에 표시됩니다.
3. 파일 보기의 오른쪽 상단에 File Upload(파일 업로드) 버튼이 나타나고 데이터 파일을 내 계정으로 가져올 수 있습니다. Create Folder(폴더 생성하기) 버튼을 클릭하면 데이터 파일을 할당할 수 있는 새 사용자 지정 폴더를 생성할 수 있습니다. 또한 계정에 있는 데이터 파일의 키워드를 검색할 수 있는 search(검색) 필드도 있습니다. 검색 기능은 파일 이름, 카테고리, 마지막 수정 날짜, 기기 유형에서 일치하는 키워드를 찾습니다.

리소스 보기:

상단 진한 파란색 리본의 Resources(리소스)를 클릭하면 Agilent Seahorse XF 어세이 워크플로를 지원하는 데 자주 사용되는 리소스 모음과 Agilent 세포 분석 지원 팀의 연락처 정보를 사용할 수 있습니다.

설정 및 사용자 정보:

기타 파일 관리 기능:

계정의 각 파일 오른쪽에 작은 점 3개 아이콘이 표시됩니다(아래 그림 참조).

5.2 분석 보기

Seahorse Analytics 분석 보기는 단일 페이지에 있는 위젯(그래프)의 모음입니다. 분석 보기에는 표준 분석 보기, 사용자 지정 분석 보기, 어세이 키트 컴패니언 분석 보기의 세 가지 카테고리가 있습니다.

• 표준 분석 보기에는 특정 속도 측정 또는 일련의 속도 측정(예: 키네틱 그래프)에 대한 OCR, ECAR, PER를 보는 데 사용되는 키네틱 그래프, 산포도 및 막대 차트와 같은 기본 위젯 옵션이 포함되어 있습니다.
• 사용자 지정 분석 보기 목록에는 사용자가 선택한 정의된 위젯이 포함된 모든 사용자 지정 분석 보기가 표시됩니다. 모든 유형의 위젯을 사용자 지정 분석 보기에 추가할 수 있습니다.
• 어세이 키트 컴패니언 분석 보기 목록에는 각 보기의 위젯이 선택한 Agilent Seahorse XF 어세이 키트의 정의된 파라미터를 나타내는 분석 보기가 표시됩니다. 어세이 키트 컴패니언 분석 보기는 지원되는 각 Agilent Seahorse XF 어세이 워크플로 및 프로토콜을 사용하여 생성된 파일의 데이터 분석에 사용할 수 있습니다.

보기 목록을 확대하여 어세이 결과 파일에 적용된 분석 보기 목록을 표시하거나 새로운 분석 보기를 추가할 수 있습니다(아래 그림 참조).

기타 중요한 사항:

• Seahorse Analytics를 사용하여 모든 XF 어세이 워크플로를 분석할 수 있는 것은 아닙니다. 사용자 지정 분석 요구에 따라 결과 데이터를 Microsoft Excel 또는 GraphPad Prism으로 내보낼 수 있습니다.
• 각 위젯에는 해당 위젯의 그래프화된 데이터를 제어하는 자체 플레이트 맵이 있습니다. 그래프화된 데이터를 편집하려면 위젯을 더블 클릭하여 위젯 편집기 보기를 엽니다. 그래프 위의 리본에 표시된 함수와 그래프 오른쪽에 있는 플레이트 맵을 사용하여 그래프화된 데이터를 제어할 수 있습니다. 파일 수준에서 변경하려면 Modify(수정) 보기로 이동합니다.
• 어세이 결과 파일을 약간 수정하고 싶을 때가 있습니다. 리본의 오른쪽 상단에 있는 Modify(수정) 버튼을 클릭하면 모든 분석 보기에서 수정 기능에 액세스할 수 있습니다. Modify(수정)을 사용하여 파일을 변경하면 결과 파일의 모든 위젯/분석 보기에 영향을 미칩니다(예: 이상치 웰 제거, 그룹 색상 변경 또는 그룹 이름 변경).

블랭크 및 사용자 지정 분석 보기: 사용자 지정 분석 보기 기능은 최고의 데이터 분석 유연성을 제공합니다. 모든 분석 보기를 사용자 지정 보기로 저장할 수 있지만, 이 예에서는 블랭크 보기에서 시작하여 사용자 지정 분석 보기를 만드는 방법을 보여 줍니다. 아래의 일련의 단계에서는 블랭크 보기/사용자 지정 보기 기능을 사용하여 분석 워크플로의 일상적인 단계를 자동화하여 워크플로 일관성을 개선하고 시간을 절약하는 방법도 중점적으로 설명합니다.

어세이 키트 컴패니언 분석 보기 정보:

1. Assay Kit Companion Analysis View(어세이 키트 컴패니언 분석 보기) » XF Cell Mito Stress Test(XF 세포 미토콘드리아 스트레스 측정): 단일 분석 보기에서 XF 세포 미토콘드리아 스트레스 측정 어세이 파라미터를 계산하고 표시하려면:

1. Add View(보기 추가) 창에서 Assay Kit Companion View(어세이 키트 관련 보기) 목록을 클릭하여 옵션 목록을 확장합니다.
2. XF Cell Mito Stress Test(XF 세포 미토콘드리아 스트레스 측정) 실험 보기를 클릭하여 어세이 파라미터 위젯을 표시합니다.
3. 중요: 4회 주입이 포함된 XF 세포 미토콘드리아 스트레스 측정 어세이의 경우 이 분석 보기를 추가하기 전에 위젯 위에 표시된 드롭다운 메뉴를 사용하여 oligomycin 주입을 식별해야 합니다. 이 oligomycin 주입 선택은 어세이 파라미터를 정확하게 계산하는 데 중요한 역할을 하며, 정확하지 않은 oligomycin 주입을 선택하면 위젯 계산과 그래프가 정확하지 않게 됩니다.
4. 원하는 파라미터 위젯(예: 기초 호흡 능력, 최대 호흡 능력 등)을 선택하여 분석 보기에 추가합니다. 위젯 주위의 파란색 윤곽선은 해당 위젯이 선택되었음을 나타냅니다. 급성 반응 위젯이 회색으로 표시된 경우, 이 파라미터는 급성 주입을 사용하는 XF 세포 미토콘트리아 스트레스 측정 실험에 대해서만 계산할 수 있으므로 선택할 수 없습니다.
5. 필요한 경우 group list(그룹 목록)에서 그룹을 끄고/켜고 Add View(보기 추가)를 클릭합니다.

또한 기존 분석 보기에 개별 XF 세포 미토콘드리아 스트레스 측정 어세이 파라미터 위젯(예: 예비 호흡 능력)을 추가할 수도 있습니다.

어세이 파라미터	수식
비미토콘드리아성 산소 소비량	Rotenone/antimycin A 주입 후 최소 속도 측정
기초 호흡 능력	(첫 번째 주입 전 마지막 속도 측정) - (비미토콘드리아성 산소 소비량)
최대 호흡 능력	(FCCP 주입 후 최대 속도 측정) – (비미토콘드리아성 산소 소비량)
양성자 누수	(Oligomycin 주입 후 최소 속도 측정) – (비미토콘드리아성 산소 소비량)
ATP-생성 관련 호흡	(Oligomycin 주입 전 마지막 속도 측정) – (Oligomycin 주입 후 최소 속도 측정)
예비 호흡 능력	(최대 호흡 능력) – (기초 호흡 능력)
예비 호흡 능력(%)	(최대 호흡 능력)/(기초 호흡 능력) × 100%
급성 반응	(Oligomycin 주입 전 마지막 속도 측정) – (급성 주입 전 마지막 속도 측정)
결합 효율	(ATP-생성 관련 호흡)/(기초 호흡 능력) × 100%

4.2. Assay Kit Companion Analysis View(어세이 키트 컴패니언 분석 보기) » XF Real-Time ATP Rate Assay(XF Real-Time ATP 생성률 어세이): 단일 분석 보기에서 XF Real-Time ATP 생성률 어세이 파라미터를 계산하고 표시하려면 다음 단계를 따릅니다. 이 분석 보기와 이 분석 보기의 위젯을 어세이 결과 파일에 추가하려면 buffer factor를 적합하게 구성해야 합니다.

1. Add View(보기 추가) 창에서 Assay Kit Companion View(어세이 키트 관련 보기) 목록을 클릭하여 옵션 목록을 확장합니다.
2. XF ATP 생성률 어세이 분석 보기를 클릭하여 어세이 파라미터 위젯을 표시합니다.
3. 유도 XF ATP 생성률 어세이(oligomycin 및 rotenone/antimycin A의 표준 주입 전 1회 또는 2회 주입)의 경우, 이 분석 보기를 추가하려면 위젯 위에 표시된 드롭다운 메뉴를 사용하여 oligomycin 주입이 주입 2인지, 주입 3인지 식별해야 합니다. 이 oligomycin 주입 선택은 어세이 파라미터를 정확하게 계산하는 데 중요한 역할을 하며, 정확하지 않은 oligomycin 주입을 선택하면 위젯 계산 및 그래프가 정확하지 않게 됩니다. 이 두 워크플로에 대한 자세한 내용은 XF Real-Time ATP 생성률 어세이 사용 설명서를 참조하세요.
4. 분석 보기에 추가할 원하는 파라미터 위젯을 선택합니다. 위젯 주위의 파란색 윤곽선은 해당 위젯이 선택되었음을 나타냅니다. 위젯이 회색으로 표시되면 어세이 파일에 파라미터를 계산하는 데 필요한 최소 주입 횟수가 없기 때문에 위젯을 선택할 수 없다는 의미입니다.
5. 필요한 경우 group list(그룹 목록)에서 그룹을 끄고/켜고 Add View(보기 추가)를 클릭합니다.

또한 기존 어세이 보기에 개별 XF ATP 속도 어세이 파라미터 위젯(예: ATP 기초 생성률)을 추가할 수도 있습니다.

표준 XF Real-Time ATP 생성률 어세이

어세이 파라미터	수식
mitoATP 생성률(기초)	[(첫 번째 주입 전 마지막 OCR 속도 측정 - oligomycin 후, Rot/AA 주입 전 최소 OCR 속도 측정) x 2 x (P/O)]
glycoATP 생성률(기초)	첫 주입 전 마지막 glycoPER 측정
총 ATP 생성률(기초)	(mitoATP 생성률) + (glycoATP 생성률)
XF ATP 생성률 지수(기초)	(mitoATP 생성률) / (glycoATP 생성률)

유도 XF Real-Time ATP 생성률 어세이:

어세이 파라미터	수식
mitoATP 생성률(기초)	[(첫 번째 주입 전 마지막 OCR 속도 측정 - oligomycin 후, Rot/AA 주입 전 최소 OCR 속도 측정) x 2 x (P/O)]
glycoATP 생성률(기초)	첫 주입 전 마지막 glycoPER 측정
총 ATP 생성률(기초)	(mitoATP 생성률) + (glycoATP 생성률)
XF ATP 생성률 지수(기초)	(mitoATP 생성률) / (glycoATP 생성률)
mitoATP 생성률(유도)	(급성 약물 주입 후, oligomycin 주입 전 평균 OCR 속도 측정) - (올리고 후 및 Rot/AA 주입 전 최소 OCR 속도 측정)] x 2 x (P/O)
glycoATP 생성률(유도)	급성 약물 주입 후 및 다음 주입 전의 glycoATP 생성률 측정 평균.
총 ATP 생성률(유도)	mitoATP 생성률(유도) + glycoATP 생성률(유도)
XF ATP 생성률 지수(유도)	mitoATP 생성률(유도) / glycoATP 생성률(유도)

5.3. Assay Kit Companion Analysis View(어세이 키트 관련 분석 보기) » XF T Cell Activation Assay(XF T 세포 활성화 실험): 단일 분석 보기에서 XF T 세포 활성화 실험 파라미터를 계산하고 표시하려면:

1. Add View(보기 추가) 창에서 Assay Kit Companion View(어세이 키트 관련 보기) 목록을 클릭하여 옵션 목록을 확장합니다.
2. XF T Cell Activation Assay(XF T 세포 활성화 실험) 분석 보기를 클릭하여 어세이 파라미터 위젯을 표시합니다.
3. Baseline(베이스라인) 확인란을 선택하여 각 위젯에 표시되는 PER 데이터를 활성제 주입 전 마지막 속도 측정인 베이스라인 속도 측정의 백분율(%)로 계산합니다. 정량적 데이터의 경우 Baseline(베이스라인) 확인란을 선택하지 않은 상태로 두어 (pmol/분) 단위로 PER을 계산합니다.
4. Activator Injection(활성제 주입) 드롭다운 메뉴에서 정확한 주입 위치가 선택되었는지 확인합니다.
5. 분석 보기에 추가할 원하는 파라미터 위젯을 선택합니다. 위젯 주위의 파란색 윤곽선은 해당 위젯이 선택되었음을 나타냅니다.
6. 필요한 경우 group list(그룹 목록)에서 그룹을 끄고/켜고 Add View(보기 추가)를 클릭합니다.

또한 기존 분석 보기에 개별 XF T 세포 활성화 실험 파라미터 위젯(예: 최대 속도)을 추가할 수도 있습니다.

아래 표는 XF T 세포 활성화 실험 파라미터 계산을 설명합니다.

어세이 파라미터	수식
T 세포 활성화	키네틱 그래프로 표시한 양성자 유출율(PER) 데이터
최대 속도	활성제 주입 후와 2-DG 주입 전의 속도 측정 데이터를 사용하는 비선형 최소 제곱 곡선 피팅 알고리즘으로 Seahorse Analytics에서 계산됩니다. 이 계산 분석법에 대한 자세한 내용은 다음을 참조하세요. H. J. Motulsky, "Exponential plateau", GraphPad Curve Fitting Guide. Accessed 20 May 2020. https://www.graphpad.com/guides/prism/8/curve-fitting/REG_Exponential-plateau.htm
검량선 아래 면적	활성제 주입 후와 2-DG 주입 전의 속도 측정 데이터를 사용하여 Seahorse Analytics에서 계산됩니다. AUC 값에는 베이스라인 위의 피크 값만 포함됩니다. 이 계산 분석법에 대한 자세한 내용은 다음을 참조하세요. H. J. Motulsky, "How to: Area under the curve", GraphPad Statistics Guide. Accessed 20 May 2020. https://www.graphpad.com/guides/prism/8/statistics/stat_area_under_the_curve.htm

6.4. Assay Kit Companion Analysis View(어세이 키트 관련 분석 보기) » XF Glycolytic Rate Assay(XF 해당 속도 어세이): 단일 분석 보기에서 XF 해당 속도 어세이 파라미터를 계산하고 표시하려면 아래 단계를 따르세요. 이 분석 보기와 이 분석 보기의 위젯을 어세이 결과 파일에 추가하려면 buffer factor를 적합하게 구성해야 합니다.

1. Add View(보기 추가) 창에서 Assay Kit Companion View(어세이 키트 관련 보기) 목록을 클릭하여 옵션 목록을 확장합니다.
2. XF Glycolytic Rate Assay(XF 해당 속도 어세이) 보기를 클릭하여 어세이 파라미터 위젯을 표시합니다.
3. 유도 XF 해당 속도 어세이(rontenone/antimycin A 및 2-DG의 표준 주입 전 1회 또는 2회 주입)의 경우, 위젯 위에 표시된 드롭다운 메뉴를 사용하여 Rotenone/Antimycin-A 주입을 식별해야 이 분석 보기를 추가할 수 있습니다. 이 Rotenone/Antimycin-A 주입 선택은 어세이 파라미터를 정확하게 계산하는 데 중요한 역할을 합니다. 정확하지 않은 Rotenone/Antimycin-A 주입을 선택하면 위젯 계산 및 그래프가 정확하지 않게 됩니다. 이 두 가지 워크플로에 대한 자세한 내용은 XF 해당 속도 어세이 사용자 설명서를 참조하세요.
4. 분석 보기에 추가할 원하는 파라미터 위젯을 선택합니다. 위젯 주위의 파란색 윤곽선은 해당 위젯이 선택되었음을 나타냅니다. 위젯이 회색으로 표시되면 어세이 파일에 파라미터를 계산하는 데 필요한 최소 주입 횟수가 없기 때문에 위젯을 선택할 수 없다는 의미입니다.
5. 필요한 경우 group list(그룹 목록)에서 그룹을 끄고/켜고 Add View(보기 추가)를 클릭합니다.

또한 기존 분석 보기에 개별 XF 해당 속도 어세이 파라미터 위젯(예: 기초 해당작용)을 추가할 수도 있습니다.

표준 XF 해당 속도 어세이

어세이 파라미터	수식
기초 해당작용	첫 주입 전 마지막 glycoPER 측정
기초 양성자 유출율(PER)*	첫 주입 전 마지막 PER 측정
해당작용으로 인한 % PER(기초)	(기초 해당작용) / (기초 PER) x 100%
* 이 파라미터가 Seahorse Analytics에서 개별적으로 보고되지 않고 다른 보고된 파라미터 값을 계산하는 데 사용됨을 나타냅니다.

유도 XF 해당 속도 어세이

어세이 파라미터	수식
기초 해당작용	첫 주입 전 마지막 glycoPER 측정
기초 양성자 유출율(PER)*	첫 주입 전 마지막 PER 측정
해당작용으로 인한 % PER(기초)	(기초 해당작용) / (기초 PER) x 100%
보상적 해당작용	Rot/AA 주입 후 최대 glycoPER 측정
유도 해당작용	유도 어세이 주입 후 및 Rot/AA 주입 전의 glycoPER 측정 평균
유도 PER*	유도 어세이 주입 후와 다음 주입 전의 PER 측정 평균
해당작용으로 인한 % PER(유도)	(유도 해당작용) / (유도 PER) x 100%
* 이 파라미터가 Seahorse Analytics에서 개별적으로 보고되지 않고 다른 보고된 파라미터 값을 계산하는 데 사용됨을 나타냅니다.

그래프로 표시된 위젯 데이터 편집: 위젯에 대해 그래프로 표시된 데이터를 사용자 정의하려면 위젯을 두 번 클릭하여 위젯 편집기 보기를 엽니다. 특정 위젯에 대해 그래프로 표시된 데이터를 사용자 정의할 수 있는 다양한 방법이 있습니다. 각 위젯의 플레이트 맵은 독립적이라는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 즉, 위젯 편집기 보기에서 변경한 사항은 해당 위젯에만 적용된다는 의미입니다.

각 그래프 위의 리본에 있는 기능은 속도 데이터 유형을 변경하거나, 정규화를 켜고 끄거나, 그룹 평균이 아닌 데이터를 웰별로 보는 등 해당 위젯 유형에 특정한 편집 기능을 제공합니다. 이러한 기능과 이를 사용하는 방법에 대한 자세한 내용은 다양한 위젯 설명을 참조하세요.

그래프 오른쪽에 있는 플레이트 맵을 사용하면 선택한 위젯 유형에 대한 계산 및 그래프 데이터에서 특정 어세이 웰을 포함하거나 제외할 수 있습니다.

위젯 아래의 그룹 목록에는 선택한 위젯 유형에 대한 그룹 평균 및 오류 데이터가 표시됩니다. 그룹 이름을 두 번 클릭하면 위젯 그래프에서 해당 그룹의 모든 데이터를 표시하거나 숨길 수 있습니다. 플레이트 맵에서 꺼진 어세이 웰은 그룹 목록에 표시되는 값에 포함되지 않습니다. 그래프 데이터에서 특정 그룹이 제외되면 아래 이미지의 "Control" 그룹과 같이 해당 그룹이 회색으로 표시됩니다.

Buffer Factor 정의

일반적인 분석 워크플로는 어세이 결과 파일에서 어세이 배지와 백그라운드 웰에 대한 buffer factor를 정의하는 것입니다. 이 정보는 Seahorse Analytics(예: XF T 세포 활성화 실험)의 여러 어세이 키트 수반 분석 보기의 많은 위젯에서 계산되고 표시되는 양성자 유출율(PER)을 계산하는 데 필요합니다. buffer factor가 제대로 구성되지 않은 어세이 결과 파일에 분석 보기를 추가하려고 하면 오류 메시지가 표시됩니다(아래 그림). buffer factor가 어세이 결과 파일의 배지 및 백그라운드 웰에 적합하게 할당되면 원하는 위젯 및/또는 분석 보기를 열 수 있습니다.

buffer factor 오류를 해결하는 단계 – 데이터 파일에 첫 번째 분석 보기를 추가할 때 위 그림과 같은 오류가 표시되면 아래 1단계부터 시작하세요. 데이터 파일에 이미 분석 보기가 열려 있는 경우 3단계부터 시작하세요.

1. OK(확인)를 클릭하여 오류 대화 상자를 닫습니다.
2. Add View(보기 추가) 창에서 Standard Views(표준 보기) > Quick View(빠른 보기)를 선택하고 OCR 키네틱 그래프 위젯을 선택합니다.

5.3 데이터 유형

세포의 산소 소비(호흡)와 양성자 배출(해당작용)은 세포 외 산소와 양성자의 농도에 변화를 일으키는데, 이를 빠르고 쉽게 측정할 수 있습니다. Agilent Seahorse XF 분석기는 세포 외 산소와 양성자 농도의 변화를 실시간으로 측정합니다. Seahorse Analytics를 사용하면 다음 유형의 데이터에 쉽게 액세스하고 검토할 수 있습니다.

1. 속도 데이터는 모든 Seahorse XF 분석기의 기본 출력입니다. Seahorse Analytics에서 계산 및 보고되는 3가지 유형의 속도 데이터는 다음과 같습니다.

2. 레벨 데이터는 속도 데이터를 계산하는 데 사용되며 일반적으로 XF 분석 워크플로의 첫 번째 단계인 데이터 품질 평가에 사용됩니다.

5.4 데이터 표시 옵션

Agilent Seahorse Analytics는 선호하는 분석 보기 유형에 따라 어세이 결과 데이터를 분석하고 해석할 수 있는 다양한 그래프 유형을 제공합니다. 분석 보기 생성 및 사용자 정의에 대한 자세한 내용은 분석 보기 섹션을 참조하세요.

1. 위젯 유형 – 키네틱 그래프: 키네틱 그래프는 XF 결과 데이터를 표시하는 가장 일반적인 방법입니다. 여기서 x축은 시간(분)이고 y축은 측정된 분석물질의 농도 변화율입니다(O₂ 또는 H+). 키네틱 그래프 위젯의 y축에 표시할 수 있는 두 가지 유형의 데이터는 다음과 같습니다. (1) 속도 데이터 – 산소 소비율(OCR), 세포 외 산성화율(ECAR), 양성자 유출율(PER) 및 (2) 레벨 데이터 – 산소 분압(mmHg) 또는 양성자 농도[mpH].

• Add Widget(위젯 추가) > Standard Graphs(표준 그래프) » Kinetic Graph(키네틱 그래프):
  Standard Graphs(표준 그래프) » Kinetic Graph(키네틱 그래프)을 사용하여 선택한 속도 유형(OCR, ECAR, PER) 및 측정의 막대 차트를 생성합니다.

2. 위젯 유형 – 막대 차트: 막대 차트는 XF 데이터를 표시하는 또 다른 일반적인 방법으로, 최적의 FCCP 농도 및 세포 분주 밀도 결정과 같은 일상적인 XF 어세이에 도움을 줍니다. Seahorse Analytics는 분석 보기에 추가할 수 있는 다양한 막대 차트 옵션을 제공하며 대부분은 어세이 전용입니다. 특정 막대 차트 위젯에 대한 자세한 내용은 여기 또는 Seahorse Analytics에서 특정 어세이 키트 관련 분석 보기를 참조하세요.

• Add Widget(위젯 추가) > Standard Graphs(표준 그래프) » Bar Chart(막대 차트):
  Standard Graphs(표준 그래프) » Bar Chart widget(막대 차트 위젯)을 사용하여 선택한 속도 유형(OCR, ECAR, PER) 및 측정의 막대 차트를 생성합니다.

3. 위젯 유형 – 에너지 맵: 에너지 맵 위젯은 X 및 Y 산포도로, 전체 또는 선택한 그룹의 선택한 속도 측정에 대해 두 가지 유형의 속도 데이터를 비교할 수 있습니다. 아래에 설명된 에너지 맵 위젯 외에도 어세이 유형에 따라 분석 보기 섹션에 정의된 분석 보기에 추가할 수 있는 몇 가지 추가 산포도 위젯 옵션이 있습니다.

• Add Widget(위젯 추가) > XF ATP Rate Assay(XF ATP 생성률 어세이) » XF ATP Rate Index(XF ATP 생성률 지수): XF ATP 생성률 지수는 현재, XF ATP 생성률 어세이 위젯 목록에서 찾을 수 있습니다. XF ATP 생성률 지수 위젯은 기초 mitoATP 생성률 대 기초 glycoATP 생성률의 비율을 빈 원 마커로 표시하고, 각 그룹의 유도 mitoATP 생성률 평균과 유도 glycoATP 생성률 평균의 비율을 채워진 원 마커로 표시합니다(유도 어세이 결과 파일에 적용되는 경우에만 – 아래 그림의 위젯은 유도 XF ATP 생성률 어세이의 데이터를 보여줍니다). 또한 이 위젯 데이터를 계산하려면 먼저 buffer factor를 어세이 배지, 백그라운드 웰 및 어세이 그룹에 적합하게 할당해야 합니다.

5.5 데이터 내보내기 및 공유

데이터를 Microsoft Excel 또는 GraphPad Prism 파일로 내보내거나 Seahorse Analytics를 사용하여 직접 공동 작업자와 결과 데이터 및 통찰력을 공유하세요.

데이터 내보내기:

Seahorse Analytics의 데이터를 Microsoft Excel, GraphPad Prism 또는 이미지 파일로 내보낼 수 있는 방법에는 여러 가지가 있습니다.

모든 속도 데이터 내보내기

선택한 파일에 대한 모든 속도 데이터가 포함된 Excel 및 Prism 파일을 생성할 수 있습니다. 이 내보내기에는 분석 보기에서 계산한 파라미터 계산(예: 예비 호흡 능력)이 포함되지 않으므로 각 위젯에서 해당 데이터를 개별적으로 내보내야 합니다.

이 내보내기 기능은 어떻게 사용되나요? 이러한 유형의 데이터 내보내기를 통해 사용자는 모든 속도 데이터(OCR, ECAR 및 PER)를 Prism 또는 Excel로 쉽게 전송하여 고품질 또는 맞춤형 수치를 생성하고, 통계 분석 및 Seahorse Analytics에서 제공되지 않는 기타 분석 기능을 수행할 수 있습니다.

개별 위젯에서 선택한 데이터 내보내기: 개별 위젯 데이터를 선택한 위젯에 대한 데이터가 포함된 Excel 및 Prism 파일로 내보낼 수 있습니다. 내보내기 파일의 데이터는 위젯 형식을 지정한 방식과 정확하게 일치합니다. 예를 들어 웰 모드에서 기초 호흡을 표시하도록 위젯을 구성하는 경우, Prism 내보내기 파일에는 각 그룹의 기초 호흡 데이터에 대한 개별 웰 값이 포함됩니다. 그룹 모드에서 기초 호흡을 표시하도록 위젯을 구성하면 Prism 내보내기 파일은 개별 웰 값이 아닌 평균 그룹 값과 오차 값을 표시합니다.

모든 속도 데이터를 내보내는 방법:

1. 임의의 분석 보기 또는 위젯 편집기 보기에서 위젯 오른쪽 상단에 있는 작은 클라우드 버튼을 찾습니다.
2. 클라우드 버튼 위로 마우스 커서를 이동하여 이미지 및 데이터 내보내기 옵션을 표시합니다.
3. 커서를 이미지 위로 이동하여 위젯을 PNG 또는 JPG 파일로 내보내고, 데이터 위로 이동하여 위젯을 Excel 또는 Prism 파일로 내보냅니다.
4. 내보내기 파일의 데이터는 위젯 형식을 지정한 방식과 정확하게 일치합니다. 이 예에서 Prism 내보내기 파일에는 플레이트의 두 그룹 모두에 대한 웰당 기초 호흡 값이 포함되어 있습니다.

이 내보내기 기능은 어떻게 사용되나요? 이러한 유형의 데이터 내보내기를 통해 사용자는 선택 속도 또는 파라미터 데이터를 이미지 파일이나 Prism 또는 Excel 파일로 쉽게 내보낼 수 있습니다. Prism 및 Excel 내보내기를 사용하면 모든 데이터를 내보내고 필요한 특정 정보를 찾는 대신 추가 분석하려는 데이터를 정확하게 얻을 수 있습니다(즉, 고품질 또는 사용자 정의 수치 생성, 통계 분석 및 Seahorse Analytics에서 제공되지 않는 기타 분석 기능 수행).

이 공유 기능은 어떻게 사용되나요? 공유 기능을 사용하면 Seahorse Analytics 계정이 있거나 없는 사람에게 응용을 통해 직접 어세이 결과 파일을 보낼 수 있습니다. 공유하기로 선택한 어세이 결과 파일은 수신자의 계정에 해당 데이터 파일의 복사본을 생성하며, 위젯 레이아웃, 선택 및 분석 보기는 파일 공유 전에 형식을 지정했던 것과 정확히 동일하게 나타납니다. 수신자는 공유 파일을 수정할 수 있지만 파일 사본은 변경되지 않습니다.

이 섹션에서는 Wave Desktop 및 Report Generator 소프트웨어를 사용하여 어세이 결과 데이터를 보고 및 분석하는 내용을 알아봅니다. Seahorse Analytics에 대한 도움말 콘텐츠를 표시하려면 여기를 클릭하세요.

Wave Desktop은 XF, XFe 및 XFp 분석기에서 생성된 결과 파일에 대한 데이터 분석 소프트웨어입니다. Wave Desktop의 유연한 분석 보기, 내장된 보고 도구 및 기타 강력한 분석 기능을 사용하여 복잡한 세포 대사 데이터를 게시 가능한 결과로 변환하세요.

XF Report Generator는 각 Seahorse XF 어세이 키트의 파라미터를 자동으로 계산하고 결과 데이터를 한 페이지의 사용자 정의 가능한 요약 보고서에 표시하는 Microsoft Excel 매크로 파일입니다.

자세히 알아보려면 아래에서 주제를 선택하세요.

5.1 PC 사양 및 호환성

5.2 데이터 유형

5.3 데이터 표시 옵션

5.4 분석 보기

5.5 XF Report Generator

5.1 PC 사양 및 호환성

Wave Desktop은 모든 Seahorse 분석기를 위한 어세이 설계 및 데이터 분석 소프트웨어이며 다음과 같은 기능을 지원합니다.

• 모든 Seahorse 분석기(XFe96, XFe24, XFp, XF96 및 XF24)의 데이터 파일 분석.
• XFe96, XFe24 및 XFp 분석기용 어세이 템플릿을 생성하고 사용자 정의.
• (1) Microsoft Excel, (2) GraphPad Prism 또는 (3) XF Report Generator로 데이터 내보내기.
• Windows 및 Macintosh PC 모두에서 Microsoft Excel(32 및 64비트)을 지원.

항상 최신 버전의 Wave Desktop 소프트웨어로 업데이트하는 것이 좋습니다. Wave Desktop 소프트웨어의 최신 릴리스는 버전 2.6.1(2019년 4월)입니다. Wave Desktop 소프트웨어는 Windows 7 운영 체제 이상이 설치된 모든 PC에 설치할 수 있습니다.

아래에서 Wave Desktop 2.6 소프트웨어의 PC 사양 및 호환성 정보를 확인할 수 있습니다.

컴퓨터	사양
Windows PC	운영 체제: Windows 7, 8.1 및 10
	프로세서: Intel Core i3(또는 그 이상)
	하드 디스크 공간: 175GB
	시스템 메모리(RAM): 4GB(최소*)
	화면 해상도: 1280 x 800(최소)
	지원되는 Excel 버전: 2010, 2013 및 2016
Macintosh PC(가상 컴퓨터 사용 필요)	운영 체제: Mac OSx 10.11 이상
	가상 컴퓨터: Parallels 12 및 Windows 7, 8.1 및 10
	프로세서: Intel Core i3(또는 그 이상)
	하드 디스크 공간: 175GB
	시스템 메모리(RAM): 4GB(최소*)
	화면 해상도: 1280 x 800(최소)
	지원되는 Excel 버전: 2011 및 2016

* 최적의 소프트웨어 경험을 위해서는 8GB(또는 그 이상) 시스템 메모리(RAM)가 권장됩니다.

5.2 데이터 유형

세포의 산소 소비(호흡)와 양성자 배출(해당과정)은 용존 산소와 유리 양성자의 농도에 빠르고 쉽게 측정 가능한 변화를 일으킵니다. Agilent Seahorse XF 분석기는 마이크로플레이트 내의 세포 단층 위에 있는 매우 작은 부피(약 2μL)의 배지를 분리하여 용존 산소 및 자유 양성자의 농도를 실시간으로 측정한 후, 각각 OCR 및 ECAR을 계산합니다.

Wave Desktop 소프트웨어를 사용하면 다음 데이터에 쉽게 액세스 및 검토할 수 있습니다.

속도 데이터는 XF 분석기의 기본 출력 데이터입니다.

레벨 데이터는 속도 데이터를 계산하는 데 사용되며 진단 목적으로도 사용될 수 있습니다.

5.3 데이터 표시 옵션

Wave는 어세이 결과 데이터를 보고 해석하기 위한 표준 그래프 옵션 세트를 제공합니다. 선택한 분석 보기 유형에 따라 Wave는 다음 중 하나로 결과 데이터를 자동으로 계산하고 그래프로 표시합니다.

키네틱 그래프

키네틱 그래프는 XF 분석기의 속도 데이터를 표시하는 가장 일반적인 방법입니다. 키네틱 그래프는 y축에 속도를 표시하고 x축에 시간을 표시합니다. 어세이 중에 데이터가 수집되어 키네틱 그래프로 실시간으로 표시됩니다. 키네틱 그래프는 Wave 소프트웨어의 빠른 보기 및 개요 분석 보기에서 볼 수 있습니다.

에너지 맵

XF 결과 데이터를 그래프로 표시하는 또 다른 일반적인 방법은 에너지 맵(산포도)으로, 산소 소비율(OCR)은 항상 y축에 표시되고 산성화 데이터(ECAR 또는 PER)는 항상 x축에 표시됩니다. 측정 드롭다운 메뉴를 사용하여 각 그룹의 에너지 맵에 표시할 속도 측정을 선택합니다. 속도 드롭다운 메뉴를 사용하여 x축 속도를 PER로 변경합니다. 에너지 맵 그래프 옵션은 빠른 보기 및 OCR 대 ECAR 분석 보기에서 볼 수 있습니다.

플레이트 맵

플레이트 맵은 각 어세이 웰의 선택된 속도 측정에 대한 속도 데이터를 표시합니다. 플레이트 맵은 어세이를 실행하는 동안 Wave의 오른쪽 상단 모서리와 빠른 보기, 개요 및 OCR 대 ECAR 분석 보기에 항상 표시됩니다. 빠른 보기에는 기본적으로 숨겨져 있는 플레이트 맵을 표시하는 버튼이 있습니다.

빠른 보기 및 OCR 대 ECAR 분석 보기의 플레이트 맵에는 산소 소비율(OCR - 상단)과 산성화 데이터(ECAR 또는 PER - 하단)의 두 가지 속도가 표시됩니다. 개요 분석 보기의 플레이트 맵에는 OCR, ECAR, PER 중 하나의 속도가 표시됩니다.

새로운 분석 보기를 열면 기본적으로 플레이트 맵에 속도 측정 1에 대한 데이터가 표시됩니다. 속도 드롭다운 메뉴를 사용하여 어세이 중에 다른 속도 측정에 대한 데이터를 표시합니다.

막대 그래프

막대 그래프는 개요 분석 보기(플레이트 맵 아래)에서만 사용할 수 있으며 선택한 측정에 대한 각 그룹의 평균 속도를 표시합니다. 디스플레이 드롭다운 메뉴를 사용하여 속도 표시를 그룹(평균)에서 웰(개별 웰) 모드로 변경합니다.

막대 그래프는 이상치, 최적 FCCP 농도, 최적 세포 분주 밀도, 또는 측정 데이터를 키네틱 그래프나 산포도로 플롯할 때 명확하지 않을 수 있는 기타 추세를 식별하는 데 사용할 수 있습니다.

그룹 목록

그룹 목록은 키네틱 그래프나 산포도에 플롯된 데이터에 대한 범례입니다.

그룹 목록을 사용하여 다음과 같은 기능을 수행합니다.

• 그룹 이름을 두 번 클릭하면 그래프 데이터에서 그룹을 숨기거나 표시할 수 있습니다.
• 그룹 통계를 표시하려면 그룹 목록 오른쪽 상단에 있는 Details(세부 정보) 상자를 선택합니다. 통계는 선택한 속도 측정에 대한 평균 및 오차로 표시됩니다. 해당 속도에 대한 그룹 통계를 표시하려면 다른 속도 측정을 선택합니다.
• 플레이트 맵에서 꺼진 어세이 웰은 계산된 그룹 통계에 포함되지 않습니다.
• 그룹이 숨겨지면 그룹의 평균 및 표준 편차는 다음과 같습니다. 평균: 0.00; 표준편차: 0:00.

Wave 소프트웨어에서 사용할 수 있는 데이터 유형에 대한 자세한 내용은 Wave 사용자 가이드의 3장을 참조하세요.

5.4 분석 보기

Wave Desktop의 어세이 결과 파일에 추가할 수 있는 4개의 사용자 정의 가능한 분석 보기가 있습니다. 최상위 리본 메뉴의 Add View(보기 추가) 버튼을 사용하여 각 분석 보기를 어세이 결과 파일에 여러 번 추가할 수 있습니다.

빠른 보기

빠른 보기는 새로운 어세이 결과 파일을 열 때 표시되는 기본 분석 보기입니다. 빠른 보기는 OCR 대 시간, ECAR 대 시간, 및 OCR 대 ECAR의 에너지 맵의 키네틱 그래프를 동시에 표시합니다.

개요

개요에는 시간 대비 속도(OCR, ECAR, PER 또는 PPR)의 키네틱 그래프가 표시됩니다. y축에는 선택한 속도가 표시되고, x축에는 시간이 표시됩니다. 각 측정에 대한 그룹 통계(평균 속도 및 오차)는 키네틱 그래프 아래 그룹 목록의 Details(세부 정보) 상자를 선택하여 표시할 수 있습니다. 개요는 일상적인 분석 기능을 위한 Wave 소프트웨어의 가장 다양한 분석 보기입니다. 개요를 표시하려면 Add View(보기 추가)를 클릭하고 보기 목록에서 Overview(개요)를 선택합니다.

팁: 보기 추가 > 개요 프로세스를 반복하여 여러 개요 분석 보기를 추가합니다. 이를 통해 특정 그룹, 응답 또는 그룹 간 비교를 표시하도록 결과 데이터 표시를 유연하게 맞춤화할 수 있습니다.

OCR 대 ECAR

OCR 대 ECAR 보기는 y축에 OCR이 있고 x축에 (기본적으로) ECAR가 있는 에너지 맵을 표시합니다. 속도 드롭다운 메뉴를 사용하여 x축에 표시되는 속도를 PER 또는 PPR로 변경합니다. OCR은 항상 y축에 표시되며 변경할 수 없습니다. OCR 대 ECAR을 표시하려면 Add View(보기 추가)를 클릭하고 보기 목록에서 OCR 대. ECAR을 선택합니다.

데이터

데이터 보기에는 어세이 결과 파일과 관련된 모든 데이터가 7개 탭으로 구성되어 있습니다.

• 그룹 데이터: 측정 번호별로 정렬된 각 그룹의 평균 속도 데이터(OCR, ECAR, PER 또는 PPR) 및 오차입니다.
• 속도: 측정 번호별로 정렬된 개별 웰 속도 데이터(OCR, ECAR, PER 또는 PPR)입니다. 오차 값은 표시되지 않습니다.
• 레벨 데이터: 측정 번호별로 정렬된 개별 웰 레벨 데이터(O₂ 및 pH)입니다.
• 원시: 각 측정에서 기록된 O₂ 및 pH 발광 값, 기준 값, 웰 및 환경 온도를 포함한 원시 측정 데이터입니다. 이 탭은 일상적인 데이터 분석이 아닌 기술 지원에 가장 일반적으로 사용됩니다.
• 보정: 웰별로 정리된 O₂ 및 pH 보정 결과입니다.
• 보정 보기: 각 어세이 웰에 대한 O2 및 pH 보정 결과로, 플레이트 맵으로 표시됩니다.
• 이벤트 로그: 분석기 일련 번호, 소프트웨어 버전, 플레이트 및 바코드 로트 번호, 어세이 중 기타 어세이와 같은 분석 정보입니다. 또한 명령 이름, 타이밍 및 결과를 포함하여 XF 분석 중에 사용되는 프로토콜 명령의 정렬 가능한 테이블도 제공됩니다.

데이터 보기를 표시하려면 Add View(보기 추가)를 클릭하고 보기 목록에서 데이터를 선택합니다. 데이터 보기를 열면 기본적으로 그룹 데이터 탭이 표시됩니다.

각 분석 보기에 대한 자세한 내용은 Wave 사용자 가이드의 3장을 참조하세요. 여기에는 베이스라인의 %로 데이터 재계산, 생물학적 파라미터(예: 세포 수)에 대한 속도 데이터 정규화, 플레이트 맵의 어세이 웰 플래그 지정 및 기타 주요 분석 기능과 특징을 포함합니다.

5.5 XF Report Generator

Agilent Seahorse XF Report Generator는 각 Seahorse XF 어세이 키트의 파라미터를 자동으로 계산하고 결과 데이터를 한 페이지의 사용자 정의 가능한 요약 보고서에 표시하는 Microsoft Excel 매크로 파일입니다.

Wave는 한 번의 클릭으로 XF Report Generator로 결과 데이터를 직접 내보낼 수 있으며, 제외된 어세이 웰 또는 정규화된 속도 데이터와 같은 Wave의 결과 데이터에 대한 모든 수정 사항이 내보내고 분석된 보고서 생성기 Excel 파일에 통합됩니다. 사용 가능한 XF Report Generator 내보내기 옵션 목록을 표시하려면 최상위 리본 메뉴에서 Export(내보내기) 버튼을 클릭하세요.

XF Report Generator를 사용하는 이유는 무엇입니까?

• 보다 효율적이고 일관된 데이터 분석 - 원시 키네틱 데이터를 해석 가능한 결과로 변환하고 반복적인 수동 계산 및 데이터 축소와 같은 번거러운 작업을 제거합니다.
• XF 결과 데이터를 몇 초 만에 요약 - 데이터는 체계적이고 사용자 정의가 가능하며 이해하기 쉬운 보고서로 표시됩니다.
• 분석 요구에 맞게 확장 가능 - 다중 파일 XF Report Generator를 사용하여 한 번에 최대 5개의 반복 실험 결과 파일을 가져오고 분석합니다.
• 보다 간단한 협업 - 특별한 소프트웨어 프로그램이나 라이센스 없이 보고서 생성기에서 결과 데이터를 검토하고 재분석합니다.
• 다음과 같은 분석을 지원합니다.
  • Seahorse XFe, XF 및 XFp 분석기에서 생성된 데이터 파일.
  • Windows PC의 Microsoft Excel 2010, 2013 및 2016.
  • Apple 컴퓨터의 Mac 2011 및 2016용 Excel.

XF Report Generator - 다운로드 페이지	단일 파일 분석	다중 파일 분석
Seahorse XF 세포 에너지 표현형 테스트	단일 파일 사용자 가이드	다중 파일 사용자 가이드
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Seahorse XF Real-Time ATP 생성률 어세이	단일 파일 사용자 가이드	제공되지 않음
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Seahorse XF Mito Fuel Flex Test	단일 파일 사용자 가이드	제공되지 않음
Seahorse XF 해당작용 스트레스 측정	단일 파일 사용자 가이드	제공되지 않음

XF 학습 센터의 이 섹션에서는 다양한 XF 어세이 키트 및 응용, 대체 어세이 조건 및 시료 유형, XF 데이터의 정규화 및 분석을 포함하여 XF 분석기 사용에 대한 다양한 주제를 소개합니다.

자세히 알아보려면 아래에서 주제를 선택하세요.

6.1 XF 키트 및 응용

6.1 XF 키트 및 응용

6.2 XF 데이터 정규화

6.2 지방산 산화 어세이

6.3 투과성 세포 및 Iso Mito

6.3 투과성 세포 및 Iso Mito

6.4 저산소 및 Spheroid

6.4 저산소 및 섬세포

6.1 XF 분석 및 응용

Agilent XF 어세이 키트 및 시약은 결과의 신뢰성과 일관성을 보장하기 위해 각 XF 분석기와 함께 사용하도록 특별히 개발되었습니다. Seahorse XF 키트 및 시약은 살아있는 세포, 투과성 세포 및 분리된 미토콘드리아의 세포 ATP 생성 속도, 미토콘드리아 기능, 해당작용 활성 및 기질 산화를 비롯한 중요한 기능적 대사 파라미터를 측정하기 위해 사전 보정 및 테스트를 거친 시약을 제공하여 XF 어세이 실행을 단순화합니다.

참고: 모든 XFp 어세이 키트 및 소모품은 XF HS Mini 분석기와 호환됩니다.

아래 자료는 광범위한 XF 어세이를 수행하기 위한 정보와 분석법을 제공합니다.